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          青海發(fā)光桿菌染色技術(shù)

          閱讀:869      發(fā)布時間:2017-7-11
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          青海發(fā)光桿菌染色通常只用一種染色劑,使細菌整個細胞染上顏色。但看不清結(jié)構(gòu)。所以只便于檢查細菌的形態(tài)、大小和排列方式等。
          【實驗?zāi)康摹?br />1、掌握單染色的操作技術(shù)
          2、觀察細菌的基本形態(tài)
          【實驗原理】
          單染色即用單純的種染料進行染色,多數(shù)采用美藍、結(jié)晶紫或石碳酸復(fù)紅等堿性染料。此法僅能顯示細胞的外部形態(tài),而不能辨別其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。染色前必須將細胞固定,其目的是殺死細菌,并使它粘附在載玻片上。此外,還可以增加菌體對染料的親和力。常用的有加熱和化學(xué)固定兩種方法。無論用哪種方法都應(yīng)盡量使細菌維持原有的形態(tài),防止細胞膨脹或收縮。
          青海發(fā)光桿菌【實驗材料、藥品及器具】
          1、菌種 大腸桿菌(Escherichia coli)
          枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis)
          2、染色液 石炭酸品紅染色或結(jié)晶紫染色液(Stining Solutions)
          3、無菌水
          4、洗瓶裝蒸餾水
          5、洗凈的載玻片(Slicle)5片
          6、顯微鏡、香柏油、接種環(huán)、酒精燈、擦鏡紙、吸水紙、二甲苯
          【實驗步驟】
          1、涂片:取一片干凈無油載玻片,在其中央滴一滴無菌水,然后用接種環(huán)以無菌操作方法取少許培養(yǎng)好的大腸桿菌,放在載玻片的水滴中涂勻,注意菌量不宜過多,否則,不易看清單個菌體。
          2、固定:將涂好的玻片在空氣中風(fēng)干或火焰上通過3~4 次,使水份蒸發(fā),此時細菌菌體緊貼在玻片上。
          3、染色:用石炭酸品紅或結(jié)晶紫染色劑30~60S,然后用洗瓶輕輕沖洗染色劑(注意不要直接沖洗染色部位),直至無多余的染液,晾干或用吸水紙從旁吸干或用微火烘干。
          4、用同樣方法將枯草芽孢桿菌制作一張涂片。
          5、鏡檢:首先在低倍鏡下找到物像,然后在涂膜中央滴一滴香柏油,換成油浸鏡觀察兩個菌種的形態(tài)和排列。
          6、去除油鏡上的香柏油:先用干凈的擦鏡紙擦2-3 次,再換另一張擦鏡紙蘸取少許二甲苯以除去殘留的香柏油,zui后用擦鏡紙擦干。擦鏡頭時應(yīng)順著鏡頭直徑方向擦,不要沿著圓周方向擦。
          青海發(fā)光桿菌【實驗結(jié)果】
          1、繪制觀察到大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的形態(tài)圖,并注明放大倍數(shù)。
          2、用文字描述兩菌株的細胞形態(tài)。

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