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          亮發(fā)光桿菌低溫冷凍保藏技術(shù)

          閱讀:848      發(fā)布時間:2017-9-26
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          1、 亮發(fā)光桿菌安瓿管或凍存管的準(zhǔn)備
          用圓底硼硅玻璃制品的安瓿管,或螺旋口的塑料凍存管。注意玻璃管不能有裂紋。將凍存管或安瓿管清洗干凈, 121℃下高壓滅菌15-20分鐘,備用。
          2、  保護(hù)劑的準(zhǔn)備
          保護(hù)劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護(hù)劑時,應(yīng)注意其濃度,一般采用10-20%甘油。
          3、  微生物保藏物的準(zhǔn)備
          微生物不同的生理狀態(tài)對存活率有影響,一般使用靜止期或成熟期培養(yǎng)物。
          分裝時注意應(yīng)在無菌條件下操作。
          菌種的準(zhǔn)備可采用下列幾種方法:
          刮取培養(yǎng)物斜面上的孢子或菌體,與保護(hù)劑混勻后加入凍存管內(nèi);
          接種液體培養(yǎng)基,振蕩培養(yǎng)后取菌懸液與保護(hù)劑混合分裝于凍存管內(nèi);
          將培養(yǎng)物在平皿培養(yǎng),形成菌落后,用無菌打孔器從平板上切取一些大小均勻的小塊(直徑約5-10毫米),真菌取菌落邊緣的菌塊,與保護(hù)劑混勻后加入凍存管內(nèi);
          在小安瓿管中裝1.2-2毫升的瓊脂培養(yǎng)基,接種菌種,培養(yǎng)2-10天后,加入保護(hù)劑,待保藏。
          4、  預(yù)凍
          預(yù)凍時一般冷凍速度控制在以每分鐘下降1℃為好、使樣品凍結(jié)到-35℃。
          目前常用的有三種控溫方法:
          ——  程序控溫降溫法,應(yīng)用電子計算機(jī)程序控制降溫裝置,可以穩(wěn)定連續(xù)降溫,能很好地控制降溫速率。
          ——  分段降溫法:將菌體在不同溫級的冰箱或液氮罐口分段降溫冷卻,或懸掛于冰的氣霧中逐漸降溫。一般采用二步控溫,將安瓿管或塑料小管,先放-20℃至-40℃冰箱中1-2小時,然后取出放入液氮罐中快速冷凍。這樣冷凍速率大約每分鐘下降1-1.5℃。
          ——  對耐低溫的微生物、可以直接放入氣相或液相氮中。
          5、  保藏
          將安瓿管或塑料凍存管置于液氮罐中保藏。一般氣相中溫度為-150℃,液相中溫度為-196℃。
          6、  亮發(fā)光桿菌保藏周期
          一般10年以上。
          7、復(fù)蘇方法
          從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管,應(yīng)立即放置在38℃-40℃水浴中快速復(fù)蘇并適當(dāng)搖動。直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為止,一般約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管,將內(nèi)容物移至適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。
          Panaxtriol    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    人參三醇    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規(guī)格:
          Ciwujianoside-B    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    刺五加皂苷B    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規(guī)格:
          Syringin    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    紫丁香酚甙(刺五加甙B)    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規(guī)格:
          Eleutheroside E    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    刺五加甙E    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規(guī)格:
          Raddeanin A    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    竹節(jié)香附素A    20mg/支    英文名稱    HPLC≥98%    規(guī)格:
          亮發(fā)光桿菌

           

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