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          上海一研生物科技有限公司

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          腦膜炎奈瑟菌A/C群(NM-AC)核酸檢測試劑盒使用步驟

          閱讀:1173      發(fā)布時間:2020-4-9
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          腦膜炎奈瑟菌A/C群(NM-AC)核酸檢測試劑盒特點:
          1、靈敏度高,抗污染能力強,定量準確,重復性好;
          2、樣本處理與PCR擴增在同一個PCR反應管中即可完成;
          3、無需加熱,無需離心,操作極其簡單,耗材消耗極少,只需微量標本即可實現(xiàn)高靈敏度檢測;
          4、設置了內對照(內標),設置了UNG酶+dUTP防污染體系,避免假陰性、假陽性結果的發(fā)生;
          5、設置了內參比熒光ROX,校正加樣誤差和管間差異,使定量更準確。

          操作步驟 

          1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

                10×PCR buffer             5μl

                dNTP mixl                 4μl

                 引物1(10pM)               2μl

                 引物2(10PM)              2μl

                 Taq酶(2U/μl)            1μl

                DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl

                加ddH2O至               50 μl

              視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。

          2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。

          3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

          4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

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