在ELISA試劑盒測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。拋開(kāi)品牌、價(jià)格來(lái)說(shuō)。
選擇ELISA試劑盒首要考慮這幾個(gè)條件：
1、編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2、加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50?l。然后在待測(cè)樣品孔先 加樣品稀釋液 40?l，然后再加待測(cè)樣品 10?l。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不 觸及孔壁，小鼠ELISA試劑盒輕輕晃動(dòng)混勻。
3、溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4、配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。
測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)濃度的抗原ELISA試劑盒反應(yīng)的光密度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)得待測(cè)樣品ELISA試劑盒反應(yīng)的光密度，從而查得抗原量。在標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)法中，定酶標(biāo)記抗原的酶活性為100%，在加入作為標(biāo)準(zhǔn)樣品的未標(biāo)記抗原后，以酶活性降低的百分率繪制曲線，從曲線上查得待測(cè)抗原的量。至于對(duì)抗體的定量，則要繪制出競(jìng)爭(zhēng)抵制曲線。在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，需進(jìn)行空白對(duì)照測(cè)定，進(jìn)行校正?；蛘咴跍y(cè)定時(shí)，將對(duì)照液作為零點(diǎn)測(cè)定點(diǎn)。
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