亮發(fā)光桿菌孢子分離法,是用食用菌的有性孢子或無性孢子萌發(fā)成菌絲,培養(yǎng)成菌種的方法。這種菌種生活力較強,但孢子個體之間有差異,且自然分化現(xiàn)象較嚴(yán)重,變異大,需經(jīng)出菇試驗才能在上應(yīng)用。
(l)單孢分離法:是每次或每支試管只取一個擔(dān)孢子, 讓它萌發(fā)成菌絲體來獲得純菌種的方法。蘑菇和草菇用單孢分離得到的菌絲,有結(jié)實能力,可采用此法分離純菌種。單孢分離上較少采用,而且技術(shù)復(fù)雜,一般采用多孢分離法。
(2)多孢分離法:就是把許多孢子接種在同一培養(yǎng)基上,讓它們萌發(fā)、自由交配來獲得食用菌純菌種的一種方法。具體操作方法,有以下幾種:
①種菇孢子彈射法:選擇個體健壯、朵形圓正,無病蟲害、出菇均勻、高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn),適應(yīng)性強的八九分成熟的種菇,切去大部分,菌柄用無菌水沖洗數(shù)遍后再用已滅菌的紗布或脫脂棉、濾紙吸干表面水分。在接種箱或無菌室內(nèi),把種菇的菌褶朝下用鐵絲倒掛在玻璃漏斗下面,漏斗倒蓋在培養(yǎng)皿上面;上端小孔用棉花塞住。培養(yǎng)皿放在一個鋪有紗布的搪瓷盤上,靜置12~20小時,菌褶上的孢子就會散落在培養(yǎng)皿內(nèi)。形成一層粉末狀孢子印(平菇極淡紫色,蘑菇、草菇 為褐色,香菇、金針菇孢子印白色)。用接種針沾取少量孢子在試管中的瓊脂外面或培養(yǎng)皿上劃線接種。待孢子萌發(fā),生成菌落時,選孢子萌發(fā)早、長勢好的菌落進(jìn)行試管培養(yǎng)。
還可用孢子采集器收集孢子。方法是選好種菇后,按上述程序,輕輕掀開玻璃鐘罩,將種菇柄朝下插在孢子采收器的鋼絲架上,放在培養(yǎng)皿正中央。隨即蓋好玻璃罩,用紗布將鐘掌周圍塞好。并在紗布上倒少許汞或無菌水。移入 20℃左右恒溫箱培養(yǎng)。
②褶上涂抹法:按無菌操作分離時;應(yīng)選擇成熟的種菇,用接種針直接插入褶片之間,輕輕抹取褶片表面子實體尚未彈射的孢子,再在培養(yǎng)基上劃線接種。
③鉤懸法:取成熟菌蓋的幾片菌褶或一小塊耳片(黑木耳、毛木耳、白木耳〕,用無菌不銹鋼絲(或鐵絲、棉線等其他懸掛材料)懸掛于三角瓶內(nèi)的培養(yǎng)基的上方,勿使接觸到培養(yǎng)基或四周瓶壁。置適宜溫度下培養(yǎng)、轉(zhuǎn)接即可。
④亮發(fā)光桿菌貼附法:按無菌操作將成熟的菌褶或耳片取一小塊, 用溶化的瓊脂培養(yǎng)基或阿拉伯膠、漿糊等貼附在配管斜面培養(yǎng)基正上方的試管壁上。經(jīng)6~12小時的培養(yǎng),待孢子落在斜面上,立即把孢子連同部分瓊脂培養(yǎng)基移植到新的試管中培養(yǎng)即可。
20mg/支 Curcurbitacin IIa 雪膽素甲 HPLC≥98%
20mg/支 Curcurbitacin Iib 雪膽素乙 HPLC≥98%
20mg/支 vitexicarpin 蔓荊子黃素 HPLC≥98%
20mg/支 LOUREIRIN B 龍血素B HPLC≥98%
20mg/支 Cochinchinenin C 劍葉龍血素C HPLC≥98%
20mg/支 demethoxyaschantin 辛夷脂素 HPLC≥98%
20mg/支 Linderane 烏藥醚內(nèi)脂 HPLC≥98%
20mg/支 Fisetin 漆黃素(非瑟酮/紫鉚素) HPLC≥98%
20mg/支 Piefeltarraenin ⅠA 苦玄參苷ⅠA HPLC≥98%
20mg/支 Piefeltarraenin ⅠB 苦玄參苷ⅠB HPLC≥98%
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