步驟一:青海發(fā)光桿菌接種
組織培養(yǎng)的接種是指將滅過菌的材料,在無菌的情況下,切成小塊,放入培養(yǎng)基的過程。科研、部門的接種工作,多在無菌室或超凈工作臺上進行,中學可制作接種箱,在箱內(nèi)進行接種。接種的方法步驟如下:
①在無菌室或接種箱中放好接種時所需要的酒精燈、貯存70%酒精和棉球的廣口瓶、各種鑷子、接種針、解剖刀、手術(shù)剪、火柴、培養(yǎng)基等。
②在無菌室或接種箱內(nèi)用紫外燈滅菌(無菌室照射20~50分鐘,接種箱照射15分鐘)。
③放入已滅菌的接種材料(用培養(yǎng)皿盛?。?。同時,操作人員用酒精棉球擦手,并對接種工具用酒精燈火焰燒灼。
④用手術(shù)刀片將材料切割成若干片段,并迅速接種入培養(yǎng)基中。接種時,錐形瓶(或試管)應斜向火焰,在酒精燈火焰附近操作。
⑤材料接種好后,將錐形瓶瓶口在酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動燒一遍,蓋好瓶蓋,注明材料名稱及接種日期。
材料接種后,應置于26~28℃的培養(yǎng)室中進行培養(yǎng)。
步驟二:青海發(fā)光桿菌植株誘導
本階段是組織培養(yǎng)中zui重要的一環(huán)。在培養(yǎng)基中植物激素的作用下,外植體通過三條途徑迅速增殖,這就是側(cè)芽增殖、誘導不定芽的形成和誘導胚狀體的形成。
* RT 5克 乙酸鈰
* RT,避光 1克 2-氨基聯(lián)苯
* 5克 硼氫化鈉
* RT 5克 異丙胺
* RT 1克 脫脂奶粉
* 2~8℃,避光 1克 肝浸粉(牛)
* RT,避光 25克 瓊脂粉
* RT,避光 100克 小牛浸膏粉
* RT,避光 5克 三號膽鹽
* RT 100克 豬膽鹽
* RT,避光 100克 酶水解干酪素
* 100克 小牛血清
青海發(fā)光桿菌
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