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          目錄:上海一研生物科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>脂肪酸代謝系列>> ADPG焦磷酸化酶(AGP)生化檢測(cè)試劑盒

          ADPG焦磷酸化酶(AGP)生化檢測(cè)試劑盒
          • ADPG焦磷酸化酶(AGP)生化檢測(cè)試劑盒
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          參考價(jià)300-5000/盒
          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

          參考價(jià):¥300 ~ ¥5000

          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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          更新時(shí)間:2023-11-07 13:56:13瀏覽次數(shù):1073評(píng)價(jià)

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          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100管/96樣 50管/48樣 25管/24樣
          貨號(hào) EY-01S1208 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
          主要用途 僅用于科研
          ADPG焦磷酸化酶(AGP)生化檢測(cè)試劑盒AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中,催化糖-1-磷酸與ATP反應(yīng)生成淀粉合成的直接前體ADPG,是植物淀粉生物合成的主要限速步驟。

          商品屬性:

          產(chǎn)品名稱:ADPG焦磷酸化酶(AGP)生化檢測(cè)試劑盒

          規(guī)格:100/96 50/48 25/24

          貨號(hào) : EY-01S1208

          測(cè)試方法:微量法 紫外分光光度法 紫外分光光度法 

          分類:脂肪酸代謝系列

          商品詳情:

          測(cè)定意義

          AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中,催化糖-1-磷酸與ATP反應(yīng)生成淀粉合成的直接前體ADPG,是植物淀粉生物合成的主要限速步驟。

          測(cè)定原理

          AGP催化的逆向反應(yīng)生成G1P,在反應(yīng)體系中添加的磷酸己糖變位酶和6-磷酸糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸糖酸和NADPH,340nm下測(cè)定NADPH增加速率,即可計(jì)算AGP活性。

          需自備的的儀器和用品

          紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水

          粗酶液提?。?/p>

          1、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測(cè)。

          2、細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測(cè)。

          3、血清等液體:直接測(cè)定。


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          ADH測(cè)定操作:

          1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。

          2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。

          3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2。△A測(cè)定管=A1-A2。

          測(cè)定步驟:

          1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

          2、將試劑二在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

          3、操作表:

          試劑名稱μL

          測(cè)定孔

          樣本

          20

          試劑二

          760

          試劑三

          10

          試劑四

          10


          將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

          注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋,使A1-A2小于0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

          NAD-MDH活力單位的計(jì)算:

          1、血清(漿)NAD-MDH活力的計(jì)算

          單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

          NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

          2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:

          (1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

          單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

          NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

          (2)按樣本鮮重計(jì)算:

          單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

          NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W

          (3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

          單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

          NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

          V反總:反應(yīng)體系總體積,8×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬(wàn)。

          公司正在銷售的產(chǎn)品:

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          植物染色質(zhì)甲基化酶(chromomethylase)活性酶連續(xù)循環(huán)

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