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上海申知心生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
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2018-10-26 閱讀(2265)
(1)復(fù)制方法 10周齡雌性BALB/c小鼠，經(jīng)其腹腔一次性注射降植烷(2,6,10,14-tetramethylpentadecane, Pristane,)0.5ml，然后小鼠常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和進食。在小鼠注射Pristane前及注射后每月作一次小鼠尿蛋白測定，依據(jù)反應(yīng)區(qū)顯色程度判斷尿蛋白陰性(－)：0mg/L；(±)：150～300mg/L；(+)：300mg/L；(++)：1000mg/L)；(+++)：3000mg/L；(++++)；>20000mg/L。注射前、注射后2周及每月一次尾靜脈取血作血清ANA與抗 dsDNA抗體測定。ANA測定使用包被人喉癌上皮細胞(human epithelial tumor Line， Hep-2)、猴肝冰凍切片的雙抗原片，抗dsDNA抗體測定采用包被綠蠅短膜蟲抗原片。反應(yīng)區(qū)加入不同稀釋度的待測血清25μl，并設(shè)陰性及陽性血清對照，室溫反應(yīng)30min，用PBS沖洗1s后再用PBS浸泡10min；加入1:50稀釋的50μl異硫氰酸熒光素(FITC)-標記的兔抗鼠Ig抗體，室溫反應(yīng)30min；然后再用PBS沖洗1s，PBS浸泡10min；甘油封片，置熒光顯微鏡下觀察。 ANA檢測結(jié)果判斷：低于1：100血清稀釋度無可見熒光核型，結(jié)果為陰性；1：100或更高血清稀釋度可見熒光核型，結(jié)果為陽性?？筪sDNA抗體檢測結(jié)果判斷：綠蠅短膜蟲動基體沒有熒光，結(jié)果陰性；僅細胞核或基體(鞭毛的基體)或胞漿出現(xiàn)熒光結(jié)果亦為陰性。綠蠅短膜蟲動基體可見清晰的均質(zhì)型、部分環(huán)狀的熒光，與陽性對照血清所見的熒光模型相同，結(jié)果為陽性。注射后8個月時處死動物。取小鼠腎臟于40g/L多聚甲醛固定72h，作常規(guī)組織切片，HE染色，光鏡下觀察。
(2)模型特點 肉眼觀察大多數(shù)模型小鼠的腹腔內(nèi)可見各臟器根部、腸系膜上附有點狀或塊狀物質(zhì)，白色質(zhì)硬，病理切片證實為反應(yīng)性增生、鈣化，中心為注射的pristane，周圍有大量脂肪細胞和炎性細胞層層包圍；個別小鼠可見脾臟腫大及出現(xiàn)大量腹水。注射后1個月模型小鼠開始出現(xiàn)蛋白尿，多為±或+；蛋白尿的陽性率和尿蛋白量呈漸進性增加，至8個月時有62.5％的小鼠出現(xiàn)不同程度的尿蛋白。注射后3個月時模型小鼠即可出現(xiàn)ANA，8個月時ANA陽性率達87.5％，滴度范圍為1：100～1：3200，核型以斑點型、核仁型、均質(zhì)型為主。注射后4個月時模型小鼠開始出現(xiàn)抗 dsDNA抗體，但滴度較低，至5個月時滴度和陽性率明顯提高；8個月時，陽性率可達47.8％，滴度為1：10～1：100。鏡下病理組織學(xué)觀察顯示，模型動物腎臟HE染色切片中部分腎小球體積增大，毛細血管襻細胞增生、層數(shù)增多，球囊壁增厚，個別腎球囊與球內(nèi)細胞間隙消失；部分腎小管上皮細胞增生并可見水樣變性，胞核嗜酸性染色增強，管腔內(nèi)可見蛋白管型；間質(zhì)有散在淋巴細胞浸潤及纖維組織增生。免疫熒光染色顯示，模型小鼠腎小球系膜毛細血管襻可見免疫復(fù)合物沉積，熒光分布呈連續(xù)性，腎小球輪廓清晰?？筪sDNA抗體與蛋白尿之間存在相關(guān)性。模型制作方法簡便，條件容易控制，動物死亡率低，患病時間較長，模型病理特征較為明顯。
(3)比較醫(yī)學(xué) 臨床上系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus, SLE)病因較為復(fù)雜，治療效果不佳，易反復(fù)發(fā)作，有的致死率。通常認為，本病發(fā)生與遺傳、環(huán)境、性激素、感染等因素相互作用有關(guān)，其中遺傳因素占主要地位。由于SLE動物模型是研究本病的發(fā)病原因、發(fā)病機制及臨床治療的重要手段，以往研究報道已通過遺傳性狼瘡鼠模型的建立，從基因水平證實了遺傳因素的致病性。近年來，有研究通過在非自身免疫性小鼠如SJL、BALB/c ByJ、 C57BL等小鼠品系中使用異十八烷、姥鮫烷、降植烷(Pristane)一次性腹腔內(nèi)注射，發(fā)現(xiàn)SJL小鼠無抗dsDNA抗體出現(xiàn)，也無抗核內(nèi)核糖體蛋白/Sm抗原(mRNP/Sm)抗體出現(xiàn)，卻出現(xiàn)了抗核糖體蛋白(RibP)抗體，其腎臟損害類似人類狼瘡性腎炎的病理變化；而BALB/c ByJ小鼠則產(chǎn)生了狼瘡非特異性及特異性自身抗體(ANA、抗nRN P/Sm抗體)，出現(xiàn)免疫復(fù)合物性腎小球腎炎及關(guān)節(jié)炎。證實采用一次性腹腔注射Pristane的方法建立的SLE動物模型，與其他化學(xué)藥物誘導(dǎo)的SLE動物模型相比臨床特征為典型；本方法復(fù)制的模型包括從臨床、免疫學(xué)及病理學(xué)方面均與人類 SLE相似，是目前較為理想的SLE動物模型。
