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上海申知心生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型 |
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2018-11-30 閱讀(1734)
(1)復(fù)制方法 健康大鼠，雌雄不限，體重為300～350g。
1)落體撞擊裝置
①有機(jī)玻璃管：長為2m、內(nèi)徑為19mm、外徑為26mm的有機(jī)玻璃管，3點(diǎn)固定于墻上，其下端距地面15cm，以放海綿床和大鼠。并在管壁上每10cm鉆一直徑為5mm的小孔，對應(yīng)兩排，以減少空氣阻力。
②打擊墊片：直徑為10mm、厚為3mm的圓形不銹鋼片，用以制作彌漫性軸突損傷模型，另一種在其不銹鋼墊片距中心2.5mm處鉆一直徑1.5mm的小孔，置入一不銹鋼圓柱，使之高出墊片平面3mm以制作彌漫性腦損傷同時(shí)合并局灶性腦損傷動(dòng)物模型。
2)腦損傷的方法 大鼠經(jīng)腹腔注射水合氯醛(按350～400mg/kg體重的劑量)或戊丨巴丨比丨妥丨鈉(按50～60mg/kg體重的劑量)麻醉。手術(shù)區(qū)域皮膚消毒，行氣管插管，呼吸機(jī)輔助呼吸。股動(dòng)脈插管以記錄動(dòng)脈壓，并監(jiān)護(hù)心電、血壓、脈搏、呼吸等變化。將大鼠俯臥固定于一已知彈性系數(shù)的海綿床上，移至有機(jī)玻璃管下端，墊片正對有機(jī)玻璃管中央，有機(jī)玻璃管上方置一滑輪，在銅柱上端系一小繩，將滑輪調(diào)整至繩索跨過滑輪后銅柱處于有機(jī)玻璃管中央為止。待動(dòng)物開始蘇醒，有肢體活動(dòng)時(shí)，將400g重銅柱由1m高處自由墜落于不銹鋼墊片上，立即移開海綿床以免再次損傷，將大鼠移至手術(shù)臺(tái)上接呼吸機(jī)給以呼吸支持。觀察打擊中及打擊前后動(dòng)物的呼吸、心率及血壓。記錄肢體活動(dòng)、尿失禁、瞳孔改變及神經(jīng)系統(tǒng)體征。敲擊后可選取3～24h間的時(shí)間段，快速斷頭取腦，記錄蛛網(wǎng)膜下腔出血及肉眼所見的腦挫傷情況。并將全腦浸泡于甲醛液中24h，固定好的腦作冠狀切片，層厚2mm HE染色。也可作心腦灌注，分別取左右頂葉皮層、海馬、胼胝體、腦干等組織，處理后超薄切片，進(jìn)行電鏡觀察。
(2)模型特點(diǎn) 敲擊后動(dòng)物的死亡率在25％左右。
1)一般癥狀 傷后動(dòng)物表現(xiàn)為豎毛、尿失禁、四肢抽搐、單側(cè)或雙側(cè)瞳孔散大、呼吸抑制等癥狀。血壓立即出現(xiàn)平均動(dòng)脈壓上升，然后是一段時(shí)間的低血壓，并在30～60min內(nèi)恢復(fù)到傷前水平。心率迅速減慢，10～15min后逐步回升至傷前水平。
2)大體病理變化 創(chuàng)傷鼠均見明顯、廣泛的蛛網(wǎng)膜下腔出血，傷后3h胼胝體、小腦上臂、腦干等處可見散在的點(diǎn)片狀出血灶，呈現(xiàn)彌漫性的腦損傷。低倍鏡下HE染色后見有明顯的蛛網(wǎng)膜下腔出血，傷后1h腦干免疫組化染色切片上發(fā)現(xiàn)有數(shù)量的軸索腫脹變粗，同期HE染色未顯示軸索的變化；傷后3、6、12、24h鼠腦免疫組化染色顯示皮層下、胼胝體、腦干等處出現(xiàn)大量的軸索損傷的進(jìn)一步改變，如分葉狀腫脹、內(nèi)折以及軸索斷裂后形成的末梢球和回縮球。神經(jīng)元胞體腫脹、胞核濃染、胞漿淺染、尼氏體減少。
3)電鏡觀察 可見索髓鞘出現(xiàn)分離腫脹、內(nèi)折，軸索內(nèi)神經(jīng)微絲紊亂、橫斷面見微管減少。髓鞘纖維常呈節(jié)段性變性膨大，神經(jīng)微絲排列混亂和變性融合，髓鞘板層松散洋蔥樣變。部分樹突也有不同程度的腫脹，透亮和空泡變，膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)可見線粒體腫脹，神經(jīng)突觸前后膜明顯增厚。
(3)比較醫(yī)學(xué) 臨床上閉合性顱腦損傷主要表現(xiàn)為彌漫性的腦損傷，本模型模擬外力所致腦損傷的特點(diǎn)，給予一個(gè)外界定力敲擊，使得動(dòng)物的主要生命指征均發(fā)生了明顯的變化。且廣泛的顱內(nèi)出血，神經(jīng)組織的大面積損傷，神經(jīng)細(xì)胞的病理學(xué)改變等，均類似于人類閉合性顱腦損傷的彌漫性損傷的特征。而且一個(gè)固定的外力敲擊，動(dòng)物的損傷程度相似，重復(fù)性好，利于損傷后病理演變過程的研究和治療結(jié)果的判斷。
