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        1. 上海申知心生物科技有限公司

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          點(diǎn)燃引起的慢性實(shí)驗(yàn)性癲癎模型

          2019-2-22  閱讀(1995)

          點(diǎn)燃引起的慢性實(shí)驗(yàn)性癲癎模型

          (1)復(fù)制方法  健康雄性大鼠,體重為250~300g。以水合氯醛(按350~400mg/kg體重的劑量)(按50~60mg/kg體重的劑量)經(jīng)腹腔注射麻醉后,固定在立體定位儀上。剪去頭頂部毛發(fā),手術(shù)區(qū)域皮膚消毒。無菌條件下沿正中線將皮膚切開1cm,按大鼠立體定位圖譜標(biāo)好杏仁核立體坐標(biāo)位置(坐標(biāo)定位:AP2mm,ML2mm, DVR8.5mm)。用小型牙鉆鉆透骨面,將長度為8.5mm的杏仁核刺激電極徐徐插入杏仁核。同時(shí)在顱骨正中線左右各旁開4mm,前后各10mm處安放4個(gè)皮質(zhì)電波記錄電極,插入深度為2mm,用牙托粉將電極固定。為防止電極脫落,可在枕骨和額骨安放2~3個(gè)小螺絲釘,并以牙托粉固定。術(shù)后肌肉注射卡那霉素(每只125mg/d)或慶大霉素(每只2萬 U/d),連續(xù)3d,以防感染。1周后可用于實(shí)驗(yàn)。

          每天在固定的時(shí)間給予大鼠電刺激一次,每次刺激3s。刺激強(qiáng)度從80μA開始,以后每日增加80μA,直至引起刺激部位的后放電,此時(shí)電流即為后放電電流。如果反復(fù)刺激始終不能誘發(fā)后放電的大鼠,終也不能形成點(diǎn)燃效應(yīng)。因此,需選擇測出后放電電流的大鼠用于實(shí)驗(yàn)。

          (2)模型特點(diǎn)  點(diǎn)燃是通過在腦內(nèi)某特定局部反復(fù)亞抽搐劑量電刺激,終導(dǎo)致強(qiáng)烈的部分或全身性癲癎發(fā)作。邊緣系統(tǒng)是常用的電刺激部位。點(diǎn)燃一旦形成,可以維持很長時(shí)間甚至終身。該模型具有以下特點(diǎn):①即使不再給以電刺激,皮質(zhì)電波的規(guī)律性、發(fā)作癲癎樣放電可維持一年以上。②再次電刺激又可以引起陣攣性發(fā)作。③少數(shù)動(dòng)物可以自然發(fā)作。④發(fā)作是通過突觸間傳遞引起的。目前認(rèn)為點(diǎn)燃模型可能是由于反復(fù)電刺激引起內(nèi)源性谷氨酸釋放增多,并使NMDA——受體敏感化以及使其數(shù)目增加的結(jié)果。點(diǎn)燃效應(yīng)可在多種動(dòng)物形成,但常用大鼠。刺激部位以杏仁核敏感,其次是蒼白球、海馬和梨狀區(qū)。但紅核、黑質(zhì)、腦干的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)等部位不敏感。電刺激的標(biāo)準(zhǔn)條件為電流波長1ms、頻率60Hz、持續(xù)1ms。其中頻率為25、60、150Hz的點(diǎn)燃作用相同。刺激強(qiáng)度:以杏仁核為例,大鼠為50~400μA,貓為100~1000μA,猴和狒狒為200~600μA。

          (3)比較醫(yī)學(xué)  點(diǎn)燃模型是目前*的一種更為接近人類、應(yīng)用廣泛的復(fù)雜部分性發(fā)作模型。據(jù)文獻(xiàn)資料,許多動(dòng)物可作為點(diǎn)燃模型,如青蛙、爬蟲類、小鼠、大鼠、兔子、狗、貓、恒河猴以及狒狒等。杏仁核以及其他邊緣系統(tǒng)的點(diǎn)燃模型的癇性發(fā)作通常經(jīng)歷五個(gè)階段:1級(jí),面部陣攣;2級(jí)。面部陣攣伴節(jié)律點(diǎn)頭;3級(jí)。面部陣攣、點(diǎn)頭、單肢陣攣;4級(jí),3級(jí)+后肢站立;5級(jí),4級(jí)+跌倒。4級(jí)和5級(jí)可作為繼發(fā)性全身性癲癎模型。點(diǎn)燃一旦建立,這種腦細(xì)胞及驚厥行為的敏感性可長期維持及至動(dòng)物終身,這便于探討癲癎研究中的神經(jīng)元高度興奮形成機(jī)制以及高度興奮的保持和發(fā)展。同時(shí)該模型還有建立方便、成本較低的優(yōu)點(diǎn),在篩選新的抗癲癎藥物及測試其副作用方面比正常動(dòng)物及其他一些模型更具敏感性和實(shí)用性。



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