液相色譜的原理
由以上方法可知,在色譜法中存在兩相,一相是固定不動的,我們把它叫做固定相;另一相則不斷流過固定相,我們把它叫做流動相。
色譜法的分離原理就是利用待分離的各種物質(zhì)在兩相中的分配系數(shù)、吸附能力等親和能力的不同來進(jìn)行分離的。
使用外力使含有樣品的流動相(氣體、液體)通過一固定于柱中或平板上、與流動相互不相溶的固定相表面。當(dāng)流動相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時,混合物中的各組分與固定相發(fā)生相互作用。
由于混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異,與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強(qiáng)弱不同,隨著流動相的移動,混合物在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配平衡,使得各組分被固定相保留的時間不同,從而按一定次序由固定相中先后流出。與適當(dāng)?shù)闹髾z測方法結(jié)合,實(shí)現(xiàn)混合物中各組分的分離與檢測。
液相色譜的分類
色譜分析法有很多種類,從不同的角度出發(fā)可以有不同的分類方法。
從兩相的狀態(tài)分類:
色譜法中,流動相可以是氣體,也可以是液體,由此可分為氣相色譜法(GC)和液相色譜法(LC)。固定相既可以是固體,也可以是涂在固體上的液體,由此又可將氣相色譜法和液相色譜法分為氣-液色譜、氣-固色譜、液-固色譜、液-液色譜。
另外,還有一種超臨界流體色譜法(supercritical fluid chromatography SFC),超臨界流體色譜是指用超臨界流體做流通相,以固體吸附劑(如硅膠)或鍵合到載體(或毛細(xì)管壁)上的高聚物為固定相的色譜法。超臨界流體是在高于臨界壓力和臨界溫度時的一種物質(zhì)狀態(tài),它既不是氣體也不是液體,但兼有氣體和液體的某些性質(zhì)(藥物色譜分析 主編丁黎 人民衛(wèi)生出版社2008年7月*版)。
液相色譜法(HPLC)是繼氣相色譜之后,70年代初期發(fā)展起來的一種以液體做流動相的新色譜技術(shù)。
液相色譜是在氣相色譜和經(jīng)典色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的?,F(xiàn)代液相色譜和經(jīng)典液相色譜沒有本質(zhì)的區(qū)別。不同點(diǎn)僅僅是現(xiàn)代液相色譜比經(jīng)典液相色譜有較高的效率和實(shí)現(xiàn)了自動化 操作。經(jīng)典的液相色譜法,流動相在常壓下輸送,所用的固定相柱效低,分析周期長。而現(xiàn)代液相色譜法引用了氣相色譜的理論,流動相改為高壓輸送(zui高輸送壓力可達(dá)4.9?107Pa);色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成,從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜(每米塔板數(shù)可達(dá)幾萬或幾十萬);同時柱后連有高靈敏度的檢測器,可對流出物進(jìn)行連續(xù)檢測。因此,液相色譜具有分析速度快、分離效能高、自動化等特點(diǎn)。所以人們稱它為高壓、高速、或現(xiàn)代液相色譜法。
HPLC 系統(tǒng)一般由液相色譜儀主要由進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。
其中高壓輸液泵、色譜柱、檢測器是關(guān)鍵部件。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機(jī)、自動進(jìn)樣器、預(yù)柱或保護(hù)柱、柱溫控制器等,現(xiàn)代 HPLC 儀還有微機(jī)控制系統(tǒng),進(jìn)行自動化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。制備型 HPLC 儀還備有自動餾分收集裝置。
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