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電子顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞方法
電子顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞方法的信息介紹由濟(jì)南浩淼醫(yī)療設(shè)備有限公司為您提供。以下內(nèi)容會(huì)證明電子顯微鏡是觀察細(xì)胞形態(tài)的方法
一、儀器與試劑
射電子顯微鏡或掃描電子顯微鏡，組織切片機(jī)，離心機(jī)，離心涂片機(jī)。
戊二醛固定液：取25%戊二醛原液10ml，加入0.2mol/L PBS液50ml，再加入蒸餾水40ml，混勻，4℃保存。
鋨酸固定液：將含有1g鋨酸的小瓶浸入清潔液一晚，用雙蒸水沖洗數(shù)遍后，將小瓶放在盛有50ml雙蒸水的100ml棕色磨口瓶?jī)?nèi)，擊破鋨酸小瓶使其內(nèi)鋨酸溶于水，1～5ml小瓶分裝，避光，4℃保存。用時(shí)再稀釋1倍成1%的應(yīng)用液。
二、操作步驟
離心收集約5×106 細(xì)胞，用PBS洗滌兩次后，棄上清，加1ml 2.5%戊二醛懸浮細(xì)胞，移入1.5ml Ep管中，室溫下4 000r/min離心15min，固定細(xì)胞0.5～1h；
在磷酸緩沖液里漂洗1～2h或更長(zhǎng)時(shí)間，盡量將戊二醛冼凈，用1%的鋨酸固定液固定30min～1h；
固定完畢后加入50%乙醇脫水10min→70%乙醇10min→90%乙醇10min→90%丙酮10min→100%丙酮三次各10min；
丙酮與環(huán)氧樹(shù)脂1:1包埋2h，再放入純包埋劑（環(huán)氧樹(shù)脂包埋全浸透）數(shù)小時(shí)；
環(huán)氧樹(shù)脂包埋，62℃烤箱二天，進(jìn)行超薄切片，用醋酸鉛鈾雙染法進(jìn)行切片染色；
在透射電子顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核的變化，照相并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
三、結(jié)果判斷
電子顯微鏡是觀察細(xì)胞形態(tài)的方法，細(xì)胞核和細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)清晰易辨。凋亡細(xì)胞染色質(zhì)固縮并凝結(jié)成塊，聚集在核膜周邊呈新月?tīng)罨颦h(huán)狀小體，細(xì)胞漿濃縮，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變疏松并與胞膜融合，形成一個(gè)個(gè)空泡，線粒體結(jié)構(gòu)無(wú)明顯改變。細(xì)胞凋亡的晚期，細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。壞死細(xì)胞的染色質(zhì)稀疏呈細(xì)顆粒狀，分布無(wú)規(guī)律，邊界不清，細(xì)胞漿腫脹，細(xì)胞器結(jié)構(gòu)破壞，細(xì)胞膜不完整。
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