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導(dǎo)致ELISA測(cè)定過(guò)失的三大要素
導(dǎo)致ELISA測(cè)定過(guò)失作用的要素主要有三大要素:標(biāo)本要素;試劑要素;操作要素。
ELISA試劑盒的基本原理使抗原(或抗體)結(jié)合到某種固相載體外表,并堅(jiān)持其免疫活性;使抗原(或抗體)與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo)抗原(或抗體),并且此酶標(biāo)抗原(或抗體)既保存其免疫活性,又保存其酶活性;測(cè)守時(shí)將受檢標(biāo)本(抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原(或抗體)按不同進(jìn)程與固相載體外表的抗原或抗體進(jìn)行反響。
再用洗刷辦法使固相載體上構(gòu)成的抗原抗體復(fù)合物與其它物質(zhì)分隔,畢竟結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的抗體或抗原量成必定份額;再參加酶反響底物后,底物被酶催化后變?yōu)橛猩a(chǎn)品,根據(jù)其色彩反響的深淺進(jìn)行定性或定量分析,以了解被測(cè)標(biāo)本中抗體或抗原含量。
ELISA試劑盒辦法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但elisa試劑盒測(cè)定中影響要素較多,并且其操作中有必定的技能懇求,在臨床查驗(yàn)中除正常反響外,有時(shí)??梢?jiàn)到一些過(guò)失作用(即假陽(yáng)性或假陰性作用)。
血清是zui常用的ELISA標(biāo)本,血漿一般可視為與血清對(duì)等的標(biāo)本,標(biāo)本導(dǎo)致的假陽(yáng)性和假陰性作用主要是干擾性物質(zhì)所構(gòu)成的,分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種:
1、內(nèi)源性物質(zhì)
有人以為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響查看作用。多見(jiàn)的干擾物質(zhì)有:類(lèi)風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠 Ig (s)抗體、穿插反響物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
2、外源性物質(zhì)
外源性物質(zhì)常常是因?yàn)橛糜贓LISA試劑盒的測(cè)定血標(biāo)本的收集、儲(chǔ)存等不妥所構(gòu)成的。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本儲(chǔ)存過(guò)久、標(biāo)本凝聚不全和采血管中添加物等影響。
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