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        1. 深圳欣博盛生物科技有限公司
          中級(jí)會(huì)員 | 第4年

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          檢測炎癥小體的激活及監(jiān)測方法

          時(shí)間:2024/2/22閱讀:494
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          炎癥小體的激活有多個(gè)重要的特征,如ASC斑點(diǎn)的形成、促炎性細(xì)胞死亡、具有生物活性的IL-1β/18細(xì)胞因子的分泌以及HMGB1的表達(dá)。為了檢測這些關(guān)鍵的特征,InvivoGen開發(fā)了體外研究炎癥小體激活中最-常-用的人源THP-1單核細(xì)胞系模型和廣泛用于報(bào)告系統(tǒng)的人源HEK293胚胎腎細(xì)胞系所衍生的細(xì)胞工具。


          檢測炎癥小體激活的方法


          1.使用RT-qPCR檢測NF-κB誘導(dǎo)的pro-IL-1β和NLRP3上調(diào)

          2.使用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)監(jiān)測細(xì)胞系中ASC斑點(diǎn)的形成

          3.使用 Western blot 檢測 caspase-1 的裂解或 pro-IL-1β/IL-18 的成熟

          4.使用ELISA測定IL-1β、IL-18或HMGB1的釋放

          5.使用乳酸脫氫酶(LDH)測定或碘化丙啶(PI)染色法檢測細(xì)胞焦亡

          6.使用檢測IL-1β、IL-18分泌的報(bào)告細(xì)胞系

          以上方法各有利弊,可以適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合這些方法來檢測炎癥小體的激活。


          實(shí)時(shí)監(jiān)測ASC斑點(diǎn)


          THP1-ASC-GFP Cells

          THP1-ASC-GFP細(xì)胞可通過熒光顯微鏡觀察活細(xì)胞中ASC斑點(diǎn)的形成。它們以依賴NF-κB的方式穩(wěn)定表達(dá)ASC::GFP融合蛋白。在誘導(dǎo)劑如Poly(dA:dT)的刺激下,炎癥小體的激活可以通過觀察熒光ASC斑點(diǎn)的組裝來分析,不會(huì)干預(yù)炎癥小體的應(yīng)答。

          檢測炎癥小體的激活及監(jiān)測方法

          產(chǎn)品名稱產(chǎn)品貨號(hào)規(guī)格
          THP1-ASC-GFP Cellsthp-ascgfp3-7 x 106 cells


          監(jiān)測細(xì)胞焦亡


          THP1-HMGB1-Lucia™ Cells

          THP1-HMGB1-Lucia™細(xì)胞是一種可靠、方便的定量檢測細(xì)胞焦亡的工具,能取代測定LDH活性的經(jīng)典方法。此測定依賴于細(xì)胞溶解介導(dǎo)的HMGB1警報(bào)素,通過與Lucia熒光素酶的融合來測量其釋放。THP1-HMGB1-Lucia™細(xì)胞經(jīng)LPS啟動(dòng)和炎癥誘導(dǎo)劑如Poly(dA:dT)處理后引發(fā)細(xì)胞焦亡,從而釋放HMGB1::Lucia到細(xì)胞外環(huán)境中。通過測量QUANTI-Luc™檢測試劑產(chǎn)生的光信號(hào),可以簡單監(jiān)測上清液中HMGB1::Lucia的水平。

          產(chǎn)品名稱
          產(chǎn)品貨號(hào)規(guī)格
          THP1-HMGB1-LuciaTM Cells3-7 x 106 cellsthp-gb1lc


          實(shí)時(shí)監(jiān)測IL-1β和IL-18的分泌


          InvivoGen已開發(fā)出報(bào)告細(xì)胞系,能簡單、快速、可靠地檢測和定量具有生物活性的人源(h)或鼠源(m)IL-1β和IL-18。這些細(xì)胞來源于人源胚胎腎HEK293細(xì)胞系。在激活細(xì)胞因子信號(hào)通路后,它們表達(dá)由NF-κB/AP-1誘導(dǎo)的分泌型堿性磷酸酶(SEAP)報(bào)告基因。使用QUANTI-Blue™溶液檢測試劑可以很容易地監(jiān)測上清液中的SEAP水平。

          檢測炎癥小體的激活及監(jiān)測方法


          HEK-Blue™ IL-1β Cells& HEK-Blue™ IL-1R Cells

          這些細(xì)胞可以監(jiān)測樣本中的hIL-1α/β、mIL-1α/β。兩種細(xì)胞系均表達(dá)內(nèi)源性人源IL-1受體(hIL-1R)。HEK-Blue™ IL-1β細(xì)胞對(duì)人源IL-1異構(gòu)體的敏感性高于鼠源的異構(gòu)體。我們建議使用此細(xì)胞系來進(jìn)行人源炎癥小體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(例如THP1衍生分析,見第6-7頁),測試上清液樣本。HEK-Blue™ IL-1R細(xì)胞被穩(wěn)定轉(zhuǎn)染表達(dá)mIL-1R,賦予對(duì)mIL-1β更高的敏感性。因此,該細(xì)胞系更適合于從小鼠的血清或細(xì)胞突變物中檢測IL-1β。然而,它們的高靈敏度可以導(dǎo)致一些細(xì)胞(例如RAW264.7衍生細(xì)胞)出現(xiàn)高背景。


          值得注意的是,這兩種細(xì)胞系都可以用來評(píng)估樣本中IL-1α警報(bào)素的水平。HEK-Blue™ IL-1β 和 HEK-Blue™ IL-1R細(xì)胞檢測一種亞型的特異性可通過在分析中加入針對(duì)另一種亞型的中和抗體來評(píng)估。

          檢測炎癥小體的激活及監(jiān)測方法

          HEK-Blue™ IL-18 Cells

          這些細(xì)胞提供了一個(gè)強(qiáng)大的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái),監(jiān)測樣本中hIL-18和mIL-18的濃度。HEK-Blue™ IL-18細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達(dá)hIL-18受體。這些細(xì)胞對(duì)hIL-18比mIL-18敏感。

          檢測炎癥小體的激活及監(jiān)測方法

          使用Invivogen的細(xì)胞因子傳感器細(xì)胞

          1.檢測具生物活性的細(xì)胞因子

          2.具成本效益

          3.短時(shí)間的實(shí)驗(yàn)操作

          4.肉眼可視化實(shí)驗(yàn)結(jié)果

          5.高靈敏度、高動(dòng)態(tài)范圍

          6.適用于藥物篩選(正?;蚋咄亢Y選、藥物效應(yīng)動(dòng)力學(xué)等)


          相關(guān)產(chǎn)品:


          產(chǎn)品名稱規(guī)格貨號(hào)
          HEK-BlueTM IL-1β Cells3-7 x 106 cellshkb-il1bv2
          HEK-BlueTM IL-1R Cells3-7 x 106 cellshkb-il1r
          HEK-BlueTM IL-18 Cells3-7 x 106 cellshkb-hmil18



          文獻(xiàn)參考:

          Martine P. et al. 2019. Cell Death Dis. doi: 10.1038/s41419-019-1491-7. HSP70 is a negative regulator of NLRP3 inflammasome activation.


          Metho S. et al. 2019. Mol. Cell. doi: 10.1016/j.molcel.2018.11.08. The Crohn’s disease risk factor IRGM limits NLRP3 inflammasome activation by impeding its assembly and by mediating its selective autophagy.


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