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          預染蛋白Mark操作使用方法

          閱讀:3609      發(fā)布時間:2018-2-27
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          EZ Mark彩色預染蛋白質(zhì)標準(10-180KD)

          D1009L1253

          250 μL

          -20

          產(chǎn)品簡介

          EZ Mark彩色預染蛋白分子量標準包含了從10k到180k共10種高度純化并預染的重組蛋白質(zhì)(10, 17, 25, 33, 40, 53, 70, 95, 130, 180k, 均帶His標簽),其中70kD條帶為橙色,10k為綠色,其余條帶為藍色,適合作為SDS-PAGE和Western的蛋白質(zhì)分子量標準。本彩色預染蛋白質(zhì)分子量標準已經(jīng)配制在1×SDS-PAGE上樣緩沖液中,直接使用,不要煮沸、稀釋,也不需要加入還原劑處理。

          根據(jù)上樣孔的大小,EZ Mark彩色預染蛋白質(zhì)分子量標準通常每次上樣5-10微升(5×1.5mm膠孔5μL足夠),即可在電泳時、電泳后和轉(zhuǎn)膜后觀察到非常清楚的蛋白條帶。

          使用方法

          1. 室溫下解凍后輕輕混勻或者是用移液槍緩慢吹打均勻,不要煮沸。

          2. 取本產(chǎn)品5ul與實驗樣品同時進行聚丙烯酰胺凝膠電泳;

          注:用戶可以根據(jù)目標蛋白濃度、實驗條件和實驗習慣通過預實驗確定合適的上樣量,可以節(jié)約成本,獲得更佳實驗圖片。

          保存條件

          冰袋運輸,-20℃長期保存,或4℃短期保存。

          注意事項

          1. Page膠內(nèi)孔徑隨膠度變化,在低濃度膠時,小分子量的蛋白標準遷移速度大于指示劑,會泳動于染料前緣,大小分質(zhì)量標準間距也相對較小。
          2. 在做Western blot時,大分子量蛋白需要更長的轉(zhuǎn)膜時間或更高轉(zhuǎn)膜的壓,蛋白質(zhì)標準也是如此。
          3. 購置凍干Marker產(chǎn)品的客戶,如果需要自己配制凍存液,可參考配方:

          儲存液:67 mM Tris-H3PO4, pH7.5, 5mM EDTA, 2 % (W/V) SDS, 33 % (V/V) Glycerol, 0.02 % (V/V) proclin300

               4.預染蛋白質(zhì)因染料與蛋白結(jié)合,在不同的緩沖體系下,染料分子所帶電荷可能會有不同,因而表現(xiàn)為不同緩沖體系下有不同的表觀分子量。EZ Mark彩色預染蛋白質(zhì)標準在Trisglycine (Tris-甘氨酸體系,zui為常用)和BisTrisMops體系下表觀分子量如下圖。 如用其他緩沖體系,可事先用非預染蛋白質(zhì)標準大致確定EZ Mark彩色蛋白質(zhì)標準的表觀分子量。

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