細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。定義 隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。
下文中將從多個(gè)維度，介紹細(xì)胞轉(zhuǎn)染的各類小知識(shí)。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)能促使在其內(nèi)表達(dá)的蛋?正確折疊并進(jìn)行復(fù)雜修飾，表達(dá)的蛋?更接近真實(shí)自然狀態(tài)，便于模擬真實(shí)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境，進(jìn)行蛋白功能研究。把目的基因轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞，表達(dá)?產(chǎn)蛋?通常有兩種?式：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系），如圖1.所示。
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染有如下特點(diǎn)：
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 | 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 | |
基因融合 | 游離存在于染色體外（episome） | 整合于細(xì)胞染色體上 |
表達(dá)快慢 | 24-72小時(shí)內(nèi)可獲得表達(dá)產(chǎn)物 | 數(shù)天，需經(jīng)過(guò)基因融合、培養(yǎng)、篩選 |
待轉(zhuǎn)基因 | 不需要線性化，超螺旋結(jié)構(gòu)更容易轉(zhuǎn)染和表達(dá) | 需要線性化，便于整合到宿主細(xì)胞 |
抗性選擇 | 待轉(zhuǎn)質(zhì)?；虿恍鑾Э剐?/span> | 待轉(zhuǎn)基因必須帶有抗性，便于篩選克隆 |
成本 | 實(shí)驗(yàn)室成本低 | 實(shí)驗(yàn)室成本高，得到穩(wěn)定株后表達(dá)成本低 |
用途 | 蛋?質(zhì)的?規(guī)模合成 | 蛋?質(zhì)?規(guī)模合成，遺傳調(diào)控機(jī)制研究，長(zhǎng)期藥理學(xué)研究 |
細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法可分為化學(xué)法，物理法，生物法，也可把化學(xué)法、物理法稱為非病毒載體，生物法稱為病毒載體。不同的轉(zhuǎn)染方法可分別用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，不過(guò)效率與效果不同。
病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染是目前在細(xì)胞治療等應(yīng)用中有前景的方向，化學(xué)法，物理法在實(shí)施過(guò)程中，對(duì)細(xì)胞均有一定程度的損害，所以用于細(xì)胞治療藥物的研究受到限制。病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染也叫侵染。人類有漫長(zhǎng)的和病毒斗爭(zhēng)的歷史，對(duì)病毒研究較為清晰，改造后病毒轉(zhuǎn)染結(jié)果相對(duì)可以控制。目前使用病毒載體的藥物已經(jīng)有多個(gè)上市，比如SMA基因治療藥物采用AAV病毒遞送，一針200萬(wàn)美元，已上市3個(gè)CART用慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒（HIV的變種）來(lái)轉(zhuǎn)入基因，已上市的埃博拉病毒疫苗用AD26病毒載體等。
病毒載體的制備是目前CRO服務(wù)中的重要內(nèi)容，病毒載體的生產(chǎn)（如圖）先用大腸桿菌等生產(chǎn)出質(zhì)粒，然后把多種質(zhì)粒（通常是三質(zhì)?；蛩馁|(zhì)粒系統(tǒng)）通過(guò)轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞中，表達(dá)出病毒載體的外殼蛋白、功能蛋白等，然后組裝成含目的基因的病毒載體，通過(guò)純化工藝獲得工具病毒，工具病毒感染細(xì)胞，腺病毒可于轉(zhuǎn)染成功2小時(shí)后即可檢測(cè)到表達(dá)產(chǎn)物，逆轉(zhuǎn)錄病毒則需要經(jīng)過(guò)多輪賽選，選擇基因整合進(jìn)細(xì)胞基因組的穩(wěn)定細(xì)胞株，用于后續(xù)研究。
Ps：李記生物EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑可用于各類病毒包裝。
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