蛋白Marker即蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)，是幾種已知分子量的蛋白質(zhì)的混合物，像“尺子"一樣用來指示蛋白質(zhì)條帶的大小。在Western Blot實(shí)驗(yàn)中，蛋白Marker主要是用來指示蛋白條帶所對應(yīng)的分子量大小，此外，蛋白Marker還可以用來輔助判斷蛋白轉(zhuǎn)膜是否成功或蛋白在凝膠上的電泳進(jìn)度等作用，所以選擇合適的蛋白Marker也是實(shí)驗(yàn)成功的重要條件之一。
李記生物預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)
預(yù)染蛋白在不同的緩沖體系下有不同的表觀分子量，以上2個圖片為兩種緩沖體系下的電泳示意圖。適合作為 SDS-PAGE 和 Western Blot 的蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)?？捎糜赟DS-PAGE和Western Blot實(shí)驗(yàn)中蛋白分子量大小的參照。
蛋白Marker的分類
• 未預(yù)染 Marker：非預(yù)染蛋白Marker在電泳過程中看不到，電泳結(jié)束后經(jīng)過蛋白染色后才能起指示作用，無法在實(shí)驗(yàn)過程中起預(yù)示作用。但是由于蛋白沒有附帶染料分子或者是標(biāo)記分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，所以最準(zhǔn)確。
• 預(yù)染 Marker：含染料和蛋白，肉眼看見，可直接觀察電泳進(jìn)程和轉(zhuǎn)膜是否完quan，較為常用。但 Marker 蛋白跟染料共價偶聯(lián)導(dǎo)致蛋白分子電泳的遷移效率發(fā)生改變，其指示的分子量不是精確值而有一定誤差。
• 曝光 Marker：在曝光步驟中，可將目的條帶和 Marker 條帶同時曝光顯示，減小誤差，并克服了預(yù)染 Marker 遷移率的改變，但價格昂貴。
蛋白Marker的選擇
• 范圍覆蓋
選擇蛋白 Marker 時，確保其分子量范圍能夠覆蓋所要研究的目標(biāo)蛋白的大小。一般來說，選擇分子量較小、中等和較大的標(biāo)準(zhǔn)，以涵蓋不同大小的蛋白。
• 雙標(biāo)記 Marker
有些 Marker 是雙標(biāo)記的，可以在電泳過程中染色，這樣的 Marker 適用于雙色標(biāo)記（例如熒光和化學(xué)發(fā)光）的應(yīng)用，提供更多的實(shí)驗(yàn)選擇。
• 質(zhì)量和穩(wěn)定性
選擇來自可靠供應(yīng)商的高質(zhì)量和穩(wěn)定的蛋白 Marker，確保其性能的一致性和準(zhǔn)確性。
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