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貨物所在地:上海上海市
所在地: 上海
更新時間:2024-11-15 15:55:51
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產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品是一款基于沉淀法的外泌體分離試劑盒,適用于多種樣本的外泌體分離,具有操作簡便、分離速度快和高回收率的優(yōu)勢。本試劑盒分離的外泌體可用于WB分析、NTA或納米流式粒徑分析、電鏡檢測、組學(xué)研究、細(xì)胞和動物功能研究等。本試劑盒兼容多種樣本類型,適用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清和尿液等。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
外泌體分離試劑盒(沉淀法) | AC15L412 | 20T |
產(chǎn)品組分
組分 | 規(guī)格 | 保存條件 |
A. 外泌體濃縮劑 | 120mL | 4℃ |
B. 外泌體純化濾器(EPF) | 20 Tubes | 常溫 |
運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸。組分A在4℃保存,組分B在常溫保存,有效期 12個月。
使用方法
自備儀器、試劑與耗材:高速冷凍離心機(jī);離心管
1. 準(zhǔn)備工作
(1) 取出在 4℃ 保存的外泌體濃縮劑,使其恢復(fù)至室溫。
(2) 建議使用新鮮樣本;如樣本保存在-80℃,請于37℃水浴中解凍備用。
2. 樣品預(yù)處理
(1) 去除細(xì)胞:對含細(xì)胞樣品,4℃,300g,離心 5min,將上清轉(zhuǎn)移至新離心管;無細(xì)胞樣品可跳過此步驟。
(2) 去除細(xì)胞及細(xì)胞碎片:4℃,2,000g,離心10min,將上清轉(zhuǎn)移至新離心管。
(3) 去除大體積顆粒:將步驟(2)獲得的上清液在4℃,12,000g,離心15min,取上清轉(zhuǎn)移至新離心管。或者:將步驟(2)的上清液通過 0.45 μm 微孔濾膜過濾,收集濾液。
3. 沉淀外泌體
(1) 將預(yù)處理后的樣品 20 mL 加入 50mL 離心管,加入 5mL 外泌體濃縮劑,渦旋混勻1min(務(wù)必混勻)。若需調(diào)整體積,可按樣本:外泌體濃縮劑= 4:1 的比例等比放大或縮小。
(2) 混勻后,4℃孵育 8 h以上;如時間允許,推薦在 4℃ 過夜孵育,但建議不超過24h。
(3) 將樣品4℃,12,000g 離心 45 min。棄上清,吸棄或小心倒出上清后,使用 200 μL 移液器盡量輕輕吸凈殘余上清。
4. 回收外泌體
(1) 重懸外泌體:向沉淀中加入 200μL無菌PBS,用移液器輕柔上下吹打,充分混勻。建議每 20mL 細(xì)胞培養(yǎng)上清用 200μL 無菌 PBS 重懸。
(2) 收集外泌體顆粒:將重懸液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL 離心管,在 4℃、12,000g 下離心 5min,保留上清,此上清液中富含外泌體顆粒。注:若沉淀較多,取離心后上清液,12,000g,5min,離心多次,直至無明顯沉淀,該上清液即為外泌體。
5. 精純外泌體
(1) 純化外泌體:將收集的外泌體粗品轉(zhuǎn)入外泌體純化濾器(EPF)上室,4℃、3000×g 離心 10 min。離心后,收集 EPF 柱底的濾液,即為純化后的外泌體顆粒。注:EPF不可重復(fù)使用,如 EPF發(fā)生堵塞,需將外泌體 12,000g 離心 30min,取上清,再用新的 EPF 純化。
(2) 外泌體儲存:分離的外泌體可立即用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);如需 24 h 內(nèi)使用,可 4℃ 保存,長期保存請分裝后置于 -80℃。
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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