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          AP01L024-RIPA裂解液(中)
          • AP01L024-RIPA裂解液(中)
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          貨物所在地:上海上海市

          更新時間:2024-09-05 14:38:09

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          RIPA (Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液,是一種經(jīng)典的動物組織/細(xì)胞快速裂解液,通過組合離子型去垢劑和非離子去污劑對組織細(xì)胞的消化作用使組織細(xì)胞崩解釋放出蛋白質(zhì),對細(xì)胞膜、胞漿亞組分、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用。

          產(chǎn)品描述
          RIPA (Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液,是一種經(jīng)典的動物組織/細(xì)胞快速裂解液,通過組合離子型去垢劑和非離子去污劑對組織細(xì)胞的消化作用使組織細(xì)胞崩解釋放出蛋白質(zhì),對細(xì)胞膜、胞漿亞組分、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用。
          李記生物 RIPA 裂解液(中) 不含 PMSF 組分; 適用于 PAGE、Western Blotting 和免疫沉淀(IP)的研究。
          訂購信息

          產(chǎn)品名稱貨號 規(guī)格
          RIPA 裂解液(中)AP01L024100mL

          運輸與保存
          常溫運輸。4℃保存,有效期 12 個月。
          配方表
          25mM Tris•HCl,150mM NaCl,1% NP-40,0.5% sodium deoxycholate,pH 7.6
          使用方法
          貼壁細(xì)胞
          1. 取適量裂解液,加入蛋白酶抑制劑混合物(100×,不含 EDTA) (貨號:AP02L084) 或 PMSF(終濃度為
          1 mM,但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性)。
          2. 去除細(xì)胞培養(yǎng)液,用預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次。按照 6 孔板每孔加入 150-200ul 的裂解液的比例均勻加
          入裂解液,如果細(xì)胞密度過高可增加裂解液的量至 250-300 uL?!咀ⅰ浚毫呀庖哼^少會使細(xì)胞裂解不
          充分,影響蛋白提取的質(zhì)量。
          3. 用槍吹打數(shù)下,冰上放置 10 min,期間每隔 2 min 用槍吹打數(shù)下。
          4. 轉(zhuǎn)移細(xì)胞裂解液于 1.5 mL EP 管中。
          5. 12,000 g,4℃ 離心 5min。
          6. 收集上清。
          懸浮細(xì)胞
          1. 取適量裂解液,加入蛋白酶抑制劑混合物(100×,不含 EDTA) (貨號:AP02L084) 或 PMSF(終濃度為
          1 mM,但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性)。
          2. 收集細(xì)胞 0.5~2×107于 1.5mL 離心管中,1mL 預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次,1,000xg 離心 3 min,棄上清,
          重復(fù)三次。
          3. 按照 6 孔板每孔加入 150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液,如果細(xì)胞密度過高可增加裂解液的
          量至 250-300uL?!咀ⅰ浚毫呀庖哼^少會使細(xì)胞裂解不充分,影響蛋白提取的質(zhì)量。
          4. 用槍吹打數(shù)下并劇烈震蕩,冰上放置 10 min,期間每隔 2 min 震蕩一次。
          5. 12,000 g,4℃ 離心 5 min。
          6. 收集上清。
          組織樣品
          1. 把組織jian成細(xì)小的碎片。
          2. 取適量裂解液,加入蛋白酶抑制劑混合物(100×,不含 EDTA) (貨號:AP02L084) 或 PMSF(終濃度為
          1 mM,但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性)。
          3. 按照每 100mg 組織加入 1mL 裂解液的比例加入裂解液(如裂解不充分可適當(dāng)增加裂解液,如果需要
          增加蛋白濃度可適當(dāng)減少使用的裂解液體積)。
          4. 用勻漿器勻漿,直至充分裂解(為防止蛋白降解請于冰上操作)。
          5. 12,000 g,4℃ 離心 5 min。
          6. 收集上清。
          注意事項
          1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
          2. 如需檢測磷酸化蛋白,則需要額外添加磷酸酶抑制劑 II cocktail(50×)(貨號:AP03L025) 。
          3. RIPA 裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,屬正?,F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA
          等的復(fù)合物。在不檢測基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗;
          如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心
          取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,例如 NF-kappaB、p53 等時,通常不必進(jìn)行超
          聲處理,就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。
          4. RIPA 裂解液(中)含有較高濃度的去垢劑,不能用 Bradford 法測定蛋白。
          5. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。
          然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使
          用勻漿器那樣裂解得比較充分。
          6. 通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150 μL 裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量
          到 200 μL 或 250 μL。

          表 1: RIPA 裂解液的使用量

          樣品來源培養(yǎng)容器收獲細(xì)胞數(shù)RIPA 用量可制備樣品數(shù)
          細(xì)胞6 孔板2.5 x 10^6150-250 μL400~600
          60 mm 培養(yǎng)板5.2 x 10^6300-500 μL200~300
          90 mm 培養(yǎng)板12.2 x 10^6500-1000 μL100~200
          25 cm2培養(yǎng)瓶5 x 10^6300-500 μL200~300
          75 cm2培養(yǎng)瓶2 x 10^71000-2000 μL50~100
          組織20 mg 組織塊2.5 x 10^6150-250 μL400~600

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          本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。



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