探針法維容氏支原體實(shí)時定量PCR試劑盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma wenyonii

貨號：Mqt-wen-20      規(guī)格：20個反應(yīng)

貨號：Mqt-wen-50      規(guī)格：50個反應(yīng)

貨號：Mqt-wen-100     規(guī)格：100個反應(yīng)

儲存：-20度，避光保存，保質(zhì)期一年。避免反復(fù)凍融。

試劑盒特點(diǎn)：

1，特異性檢測維容氏支原體，準(zhǔn)備樣品時注意不要污染其他動物血制品。

2，靈敏度高，反應(yīng)液中僅1個基因組時檢出率為58%。線性范圍跨越8個數(shù)量級。

3，使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力強(qiáng)和熱穩(wěn)定性好的特點(diǎn)；采用熱啟動方式，可抑制非特異性擴(kuò)增，降低背景熒光。

4，帶有陽性對照樣品，可用于檢驗(yàn)試劑盒有效性。

5，帶有dUTP和UDG酶，可降低殘留DNA的污染。

嗜血支原體（Hemotropic Mycoplasma，或hemoplasma)是一類寄生于紅細(xì)胞表面的細(xì)菌，無細(xì)胞壁，可以感染很多哺乳動物，包括貓、犬、豬、牛、羊等，也包括人類。嗜血支原體曾被命名為血巴通氏體（Hemobartonella）和附紅細(xì)胞體（Eperythrozoon），根據(jù)16S rRNA基因序列分析，被重新歸類為支原體。在牛體內(nèi)已發(fā)現(xiàn)的嗜血支原體有兩種：維容氏支原體（Mycoplasma wenyonii）和Candidatus Mycoplasma haemobos。

維容氏支原體，舊稱維容氏附紅細(xì)胞體（Eperythrozoon wenyonii），也有稱為溫氏支原體、文氏支原體、溫氏附紅細(xì)胞體、維氏附紅細(xì)胞體、牛附紅細(xì)胞體、溫氏血蟲體、文氏附紅血球體，發(fā)現(xiàn)于1934年，目前為止僅在牛體內(nèi)發(fā)現(xiàn)。血涂片檢測結(jié)果顯示，其游離于血漿或附著在紅細(xì)胞表面，在全世-界廣為分布，可與無形體（Anaplasma）、巴貝蟲（Babesia）和泰勒蟲（Theileria）形成共感染。多數(shù)情況下牛在感染后無臨床表現(xiàn)，有時會出現(xiàn)貧血、發(fā)熱、后肢水腫、乳頭腫脹、產(chǎn)奶量突降和體重減輕等癥狀。感染后很難清除，可能終身帶菌。一般認(rèn)為吸血性節(jié)肢動物是其傳播途徑。

維容氏支原體尚無合適的體外培養(yǎng)方法，因此難以開發(fā)蛋白類檢測方法。檢測方法一般采用吉姆薩染色的血涂片法。血涂片法的檢測靈敏度和特異性均比較差，容易受到人工制片方法和血液里其他成分（如：Howell–Jolly體）的干擾，且支原體易從紅細(xì)胞表面脫落，造成漏檢。而PCR法在靈敏度上則有明顯的優(yōu)勢，且可以區(qū)分支原體種類。定量PCR法與普通PCR法相比，不僅可以進(jìn)行定量分析，而且操作更為方便，更少受環(huán)境污染的影響。

本試劑盒基于16S rRNA基因設(shè)計特異性引物和探針，可以準(zhǔn)確識別維容氏支原體，與羊支原體（Mycoplasma ovis）、豬支原體（Mycoplasma suis）、以及寄生于梅花鹿的Candidatus Mycoplasma haemocervae和Candidatus Mycoplasma erythrocervae有交叉反應(yīng)，而與Candidatus Mycoplasma haemobos及其他生物的基因組無交叉反應(yīng)。由于嗜血支原體對宿主有嚴(yán)格的特異性，檢測時只需注意嚴(yán)格操作，不污染其他動物的血源，就不會對檢測造成干擾。對不同健康狀況的牛群進(jìn)行檢測，在159只患致命貧血牛中獲得133個陽性，在57只患不相關(guān)疾病牛中獲得33個陽性，在61只健康牛中獲得38個陽性，而在47只健康牛犢中只獲得2個陽性。

本試劑盒包含熱啟動DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探針、陽性對照品、ROX染料，和用以防止殘余DNA污染的UDG（Uracil-?DNA?Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用戶只需準(zhǔn)備好DNA樣品即可使用。

本試劑盒采用的DNA聚合酶源自極-端嗜熱菌（Thermus thermophilus），經(jīng)改造后較普通的Taq酶具有更強(qiáng)的抗抑制能力和熱穩(wěn)定性。通過結(jié)合特異性單克隆抗體，在室溫下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循環(huán)的熱變性階段，抗體受熱被去除，此時DNA聚合酶活性恢復(fù)，因此獲得“熱啟動"功能。熱啟動可減少殘余DNA的污染，提高PCR擴(kuò)增效率、靈敏度和目的片段產(chǎn)量。

UDG和dUTP用于消除PCR擴(kuò)增中的殘余污染。dUTP可以確保擴(kuò)增后的DNA中均含有尿嘧啶。UDG可從單鏈或雙鏈DNA上去除尿嘧啶殘基，從而阻止含有尿嘧啶的DNA作為模板繼續(xù)擴(kuò)增。UDG在正常的PCR循環(huán)過程中被高溫滅活，對PCR反應(yīng)沒有影響。

本產(chǎn)品僅供研究使用。

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