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薄層層析板是用高純度薄層層析硅膠(粉狀)調(diào)入一定量的粘結(jié)劑噴制成,板面純白、平整均勻、細(xì)密。主要成分為SiO2·nH2O,化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,除強(qiáng)堿和強(qiáng)酸外,不與其他酸堿反應(yīng)。薄層層析板可直接用于多種類(lèi)型有機(jī)物質(zhì)的定性或定量分析。
薄層層析板可以適合絕大多數(shù)的物質(zhì)。Merck的正相硅膠板采用Silica 60為原材料,通過(guò)*的聚合技術(shù)使薄層板的表面堅(jiān)硬且光滑的表面使得薄層層析板擁有*的分離效果。
在制備薄層層析板時(shí)大部分靠的是經(jīng)驗(yàn),要關(guān)注液體往下流的速度,在操作時(shí)候要均勻薄厚一致的鋪在載玻片上,然后舀一勺倒在載玻片中間使其慢慢布滿整塊板面,之后再用手輕輕鎮(zhèn)動(dòng)幾下,記住一定不要有氣泡。
薄層層析板就是我們通常所說(shuō)的硅膠板,要了解制作與操作方法必須先知道其原理;
薄層層析法是一種微量而快速的分析方法,操作容易,設(shè)備要求低,但對(duì)于每一種被分離的物質(zhì)都需要各自獨(dú)立的方法,TLC主要應(yīng)用于氨基酸、多肽、糖脂、核苷酸和生物堿類(lèi)多種物質(zhì)的分離和鑒定。
1.樣品的溶解:將薄層層析板樣品溶于展開(kāi)劑極性相近、揮發(fā)性高的有機(jī)溶劑。
2.點(diǎn)樣:控制上樣量,點(diǎn)樣基線距底邊2.0 cm,控制樣點(diǎn)直徑(5 mm)及點(diǎn)間距離(1-1.5 cm),避免因擴(kuò)散而影響檢測(cè)(下圖),點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。
3. 展層:展層容器必須密封,提前加入展開(kāi)溶劑,使溶劑蒸氣達(dá)到平衡。展開(kāi)劑不能高于上樣點(diǎn),否則,無(wú)法求得Rf值和準(zhǔn)確判斷粗產(chǎn)物中各組分在薄層板上的相對(duì)位置。
4. 薄層層析板展開(kāi)劑的選擇條件:有良好的溶解性、使待分離組分間分開(kāi)、待測(cè)組分的Rf值在0.2~0.8之間、不與待測(cè)組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)、沸點(diǎn)適中,黏度較小、展開(kāi)后組分斑點(diǎn)圓且集中、混合溶劑zui好用新鮮配制。
5. 邊緣效應(yīng):邊緣效應(yīng)是樣品在層析時(shí),薄層板兩邊的斑點(diǎn)比中間斑點(diǎn)移動(dòng)快,并向兩邊偏斜。其原因是用混合溶劑展開(kāi)時(shí),極性較弱和沸點(diǎn)較低的溶劑在薄層板兩邊沿處較易揮發(fā),使薄層板上的展開(kāi)劑比例不一,而出現(xiàn)邊緣效應(yīng),解決邊緣效應(yīng)zui有效的方法是剪去薄層板浸入展開(kāi)劑一端的兩角。
薄層層析板的用途:在醫(yī)藥、農(nóng)藥、中草藥、有機(jī)化工產(chǎn)品及糧食、食品的微量雜質(zhì)及主要成份的鑒定中已得到普遍應(yīng)用。
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