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干酪中黃曲霉毒素M1專業(yè)解決方案
泰樂祺科技 推出干酪中黃曲霉毒素M1專業(yè)解決方案-
針對近日來國家質(zhì)檢總局公布了的蒙牛乳業(yè)(眉山)和福建長富純牛奶抽查的產(chǎn)品被檢出黃曲霉毒素M1超標(biāo)的問題。蒙牛乳業(yè)對此向民眾進行了致歉申明,反應(yīng)了民族企業(yè)的責(zé)任心和對食品安全的重視。對于黃曲霉毒素M1的定量,在之前的相關(guān)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中有明確規(guī)定,其中:鮮乳及其乳制品(折算為鮮乳汁)不得超過0.5ug/kg;嬰兒代乳食品不得檢出黃曲霉毒素b1。(GB 2761-2005國家標(biāo)準(zhǔn)—食品中真菌毒素定量 GB 9676-2003國家標(biāo)準(zhǔn)—乳及乳制品中黃曲霉毒素M1定量!
黃曲霉毒素主要存在于谷物、堅果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些與人類血液,動物飼料相關(guān)的產(chǎn)品中。霉菌的生長并不一定表明黃曲霉毒素的存在,因為黃曲霉毒素只有在濕度、溫度適合及通風(fēng)良好才會生成。黃曲霉毒素B類具有藍色熒光,G類具有綠色熒光。除了蔬菜中常見的(B1,B2,G1,G2),還有存在喂食了有毒飼料的奶牛的牛奶中的黃曲霉毒素M,其中毒性最高的M的代謝物為4-羥基化的產(chǎn)物Bs.黃曲霉毒素M1是黃曲霉毒素B1的羥基化代謝產(chǎn)物,也是一種強致癌物質(zhì)。其危害巨大,人類日常消費食品中如牛乳及其制品是易受到黃曲霉毒素M1污染的食品之一。黃曲霉毒素的危害性在于對人及動物肝臟組織有破壞作用,嚴重時,可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。毒性是pi霜的100倍其實主要是指黃曲霉毒素比pi霜毒。
目前來講,Aflatoxin M1的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC),酶聯(lián)免疫檢測法等。液相色譜法可以精確的檢測奶制品中黃曲霉毒素的微小含量。而使用黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒則能夠快速而準(zhǔn)確的分析樣品中黃曲霉毒素M1殘留。
作為國內(nèi)專業(yè)從事霉菌毒素檢測技術(shù)與產(chǎn)品服務(wù)的主要供應(yīng)商, 2010年泰樂祺科技投巨資成立了"檢測應(yīng)用實驗室",重點關(guān)注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等檢測技術(shù)問題,以期望快速提出解決方案。近期應(yīng)針對奶中出現(xiàn)的黃曲霉毒素M1超標(biāo)問題,泰樂祺科技提供了兩種檢測方案,可以幫助企業(yè)輕松應(yīng)對奶中黃曲霉毒素M1的定量檢測。
高效液相色譜法:
根據(jù)國標(biāo)《GB 5413.37—2010》食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)乳和乳制品中黃曲霉毒素M1 的測定
實驗用前處理:
實驗儀器和好耗材包括:
恒溫水浴鍋 溶劑過濾器(帶真空泵)1000ml 高速勻質(zhì)器 黃曲霉毒素免疫M1親和柱玻璃纖維濾紙 玻璃注射器 無熒光特性玻璃試管 空氣壓力泵 超聲波清洗機 定量濾紙 量筒 樣品瓶 容量瓶 移液器或移液管
實驗用試劑:色譜乙腈色譜甲醇 氫氧化鈉 石油醚 超純水或去離子水等等
HPLC條件:
高效液相色譜儀 | |
色譜柱 | C18柱,150*4.6mm,5um |
流動相 | 乙腈-水(25:75) |
熒光檢測器: | 激發(fā)波長365nm,發(fā)射波長435nm; |
柱 溫 | 室溫 |
流速 | 1.0ml/min |
進樣量 | 20ul |
出峰時間 | 10分鐘左右 |
樣品取樣:真菌毒素分析的最大誤差來源是樣品的收集和取樣過程,所以必需保證樣品收集和取樣具有代表性。
樣品前處理:分不同樣品
干酪:稱取適量切細或粉碎,過篩用加純水溶解,高速均質(zhì)器勻漿,超聲提取后收集上清液,然后用石油醚進行兩次萃取,然后用適宜的有機溶液萃取,取若干上清液過柱凈化
免疫柱凈化步驟:全都符合GB/T 18980-2003
┅┅取出免疫親和層析柱, 恢復(fù)至室溫,將上方塞子取出斜剪斷,再插回親和柱上。
┅┅將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取清澈液注入玻璃注射器;
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;
┅┅更換玻璃注射器與親和柱連接,在注射器中加入10ml水,調(diào)節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。
┅┅準(zhǔn)確加入4mL色譜級乙腈洗脫,流速為1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測。
注:收集管中的洗脫液即為純化后的樣品,可直接用ELISA,熒光和高效液相等方法檢測。
HPLC 檢測需要儀器與耗材
產(chǎn)品名稱 | 說明 | 規(guī)格 |
黃曲霉毒素M1固體標(biāo)準(zhǔn)品 | 參比對照使用 | 100ug 1mg |
黃曲霉毒素M1液體標(biāo)準(zhǔn)品 | 濃度0.5ug/ml, 溶于乙腈 | 1ml |
PriboFast 黃曲霉毒素M1免疫親和柱 | 用于 樣品前處理柱 分析黃曲霉毒素 | 25/50T |
PriboFast泵流操作架(8位) | 用于免疫親和柱凈化樣品處理,方便控制流速 | |
黃曲霉毒素檢測專用玻璃纖維濾紙 | 用于去除HPLC檢測時部分雜峰,有效提高靈敏度。110,1.5um | 100P
|
不銹鋼均質(zhì)器 | 高速勻漿樣品,有效提高萃取效率 | |
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀-超聲波發(fā)生器 |
酶聯(lián)免疫檢測法:符合國家標(biāo)準(zhǔn)
酶聯(lián)免疫檢測法采用競爭ELISA,在微孔板上預(yù)包被黃曲霉毒素B1抗原,加入樣本(或黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品溶液)及辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的黃曲霉毒素M1與預(yù)包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競爭結(jié)合辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體。未結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液,讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負相關(guān)。對照標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可得出相應(yīng)殘留物黃曲霉毒素M1的含量。
樣品處理
牛奶 直接離心取上清液用于檢測
奶粉及其他固狀奶制品:需要溶解于去離子水中,離心取上清液用于檢測
試劑盒檢測時間:30分鐘+30分鐘
交叉反應(yīng)率:
Aflatoxin M1 | 100% |
Aflatoxin B1 | 8% |
Aflatoxin B2 | 10% |
Aflatoxin G1 | 7% |
Aflatoxin G2 | 5% |
ELISA 方法檢測需要:
說明 | ||
PriboFast 黃曲霉毒素M1酶聯(lián)免疫檢測試劑盒 | 檢測范圍 (0.1 ppb -8.1ppb) | 96孔 |
雷勃半支滅菌移液器(彩色) | 多個量程:0.5-10; 20-200; 5-50; 1000-5000ul | 支 |
雷勃八道半支滅菌移液器 | 量程: 5-50ul; 50-300ul | 支 |
酶標(biāo)儀 | 進口、國產(chǎn)儀器, | 臺 |
分析人員要求:
化學(xué)分析儀器及其相關(guān)專業(yè)或有高效液相色譜儀操作經(jīng)驗的人員。
注:作為面向全球提供霉菌毒素檢測技術(shù)解決方案的主要服務(wù)商之一,PriboLab憑借強大的研發(fā)團隊和霉菌毒素檢測技術(shù)的研究,為全球農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、食品加工與糧食、飼料工業(yè)等行業(yè)提供專業(yè)的真菌毒素檢測技術(shù)產(chǎn)品與技術(shù)服務(wù)。北京泰樂祺作為 PriboLab在中國的專屬合作伙伴,積極為國內(nèi)客戶提供優(yōu)質(zhì)的霉菌毒素檢測技術(shù)與產(chǎn)品服務(wù),為國內(nèi)客戶提供適宜的霉菌毒素檢測方案,幫助國內(nèi)客戶建立高效優(yōu)質(zhì)的霉菌毒素項目檢測平臺。
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