一、適用范圍
T-2毒素Elisa試劑盒可定性、定量檢測飼料等樣本中的T-2毒素。
二、試驗原理
采用競爭ELISA,在微孔板上預(yù)包被T-2毒素抗原,加入樣本(或T-2毒素標(biāo)準品溶液)及辣根過氧化物酶標(biāo)記的T-2毒素抗體。樣本或標(biāo)準品溶液中的T-2毒素與預(yù)包被在板孔上的T-2毒素抗原競爭結(jié)合辣根過氧化物酶標(biāo)記的T-2毒素抗體。與樣本或標(biāo)準品溶液中的T-2毒素結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液,讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物T-2毒素抗原的含量成負相關(guān)。對照標(biāo)準曲線,即可得出相應(yīng)殘留物T-2毒素的含量。
三、注意事項
1. 室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20~25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準的OD值偏低。
2. 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
3. 每加一種試劑前需將其搖勻。
4. 反應(yīng)終止液為2M鹽酸,避免接觸皮膚。
5. 不要使用過了有效日期的試劑盒;也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6. 儲存條件: 保存試劑盒于2~8℃,不要冷凍,將不用的酶標(biāo)板微孔板放進自封袋重新密封。標(biāo)準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。保存期:黃曲霉B1試劑盒有效期為12個月。
7. 試劑變質(zhì)的跡象: 發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時,表示試劑可能變質(zhì)。
8. 在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時間為20~30min即可。若顏色較淺,可延長反應(yīng)時間到35min(或更長),但不得超過40min。反之,則減短反應(yīng)時間。
9. 該試劑盒適宜的反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。