生物制藥行業(yè)的小伙伴們,如果您正在做蛋白電荷異構(gòu)體的分析,80%-90%的人手頭上都有一款ProPac WCX-10的經(jīng)典色譜柱,每次拜訪客戶,大家都說這柱子價格貴??!有沒有妙招來延長這款柱子的壽命,降低檢測成本。 我們傾聽大家的心聲,這里給出一些小竅門和注意事項,幫您節(jié)省時間成本和經(jīng)濟成本!
有圖有真相,首先我們先剖析一下這跟柱子填料的結(jié)構(gòu)。
經(jīng)過庖丁解牛,我們知道了這根柱子的結(jié)構(gòu),那么第二步要學(xué)會看QAR( N細(xì)胞色素C>2250, 1.0<As<1.7, P<1760)并重復(fù)COA條件做個入庫檢驗。符合出廠標(biāo)準(zhǔn)再使用。
三是重點的,掏心窩的話了,仔細(xì)閱讀柱子的快速操作手冊。
第四步就是我們重點中的重點了,色譜柱的清洗方法。
1.對于輕度污染,使用1-2M高鹽溶液在分析完成后進行清洗就可以了。
2.對于比較嚴(yán)重的污染,進樣100-500uL或者更多進樣體積的0.1-1M NaOH進行清洗。(在進行此步操作時,請在緩沖液A體系下進行,完成進樣NaOH后,進樣緩沖液A 500ul)
3.使用NaOH過柱子清洗。
.配置20 mmol/L MES(pH6.5)的緩沖液(使用NaOH調(diào)節(jié)pH到6.5,,并對流動相超聲脫氣)。
.使用20 mmol/L NaOH為流動相,以0.5 mL/min的流速在室溫下,沖洗柱子15分鐘。
.使用20 mmol/L MES(pH6.5)的緩沖液,以 1mL/min的流速平衡柱子1小時。
4.20 mmol/L MES(pH6.5)的緩沖液高溫處理。
.以0.2 mL/min或者0.5 mL/min的流速在50度下平衡柱子48小時。
.以0.5 mL/min的流速在80度下平衡柱子8小時。
5.如果有保護柱,請將保護柱和分析柱分開獨立清洗。
6.如果上述清洗方法無效,且有柱壓上升的現(xiàn)象,可以將柱子反接在系統(tǒng)上清洗,但是不要超過該柱子能耐受的大壓力值。