bend.3細胞小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞

1） 來源：蒂科生物細胞庫

2） 形態(tài)：貼壁 上皮樣

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

6） 運輸：順豐發(fā)貨

培養(yǎng)條件：

培養(yǎng)基：DMEM（含1.5g/L 碳酸氫鈉）+10%FBS或ECM(sciencell,1001)（推薦HAKATA貨號:HN-FBS-500）

溫度：37℃     氣相：95%空氣，5%二氧化碳

傳代：

1.用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行1-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代，一般2到3天換一次液；

2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對其進行傳代，傳代比例為1:2到1:4；

3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（diyi次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為zuijia消化時間，記錄zuijia消化時間，以便于下次消化），消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后收集細胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細胞，進行傳代。

凍存：

建議使用本公司無血清細胞凍存液貨號：H-W-100，用4度保存的冷凍液直接重懸細胞，不能預(yù)熱后使用。

保存條件：液氮存儲

溫馨提示：（常見問題，處理方式）

T25瓶為例；

1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注：diyi次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。

*細胞：M001 3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細胞 DMEM(H)+10%NCS 貼壁 成纖維細胞樣

M002 NIH/3T3 小鼠胚胎細胞 DMEM(H)+10%NCS 貼壁 成纖維細胞樣

M003 Raw264.7 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 部分懸浮 圓形

M004 B16-F10 小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)細胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 上皮樣和紡錘形混合

M005 B16 小鼠黑色素瘤細胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 上皮樣和紡錘形混合

M006 CT26.WT 小鼠結(jié)腸癌細胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 成纖維細胞樣

M007 SV40 MES 13 小鼠腎小球系膜細胞 DMEM/F12(3:1)+14 mM HEPES+5%FBS 貼壁 肌成纖維細胞樣

M008 F9 小鼠畸胎瘤細胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 上皮樣

M009 MLE-12 小鼠肺泡上皮細胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 上皮樣

M010 Sp2/0-Ag14 小鼠骨髓瘤細胞 DMEM(H)+10%FBS 懸浮 淋巴母細胞樣

M011 BV 2 小鼠小膠質(zhì)細胞   1640+10%FBS 貼壁 上皮樣 多種混合

M012 DC2.4 小鼠樹突狀細胞 1640+10%FBS 貼壁 樹突狀

M013 U14 小鼠子宮頸癌細胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 上皮樣

M014 M-NFS-60 小鼠骨髓性白血病細胞 1640+10%fbs+62 ng/ml M-CSF+0.05mM2-巰D基D乙D醇 懸浮 淋巴母細胞樣

M015 mMSC 小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞 DMEM/F12+10% FBS 貼壁 成纖維細胞樣

M016 HL-1 小鼠心肌細胞 DMEM+10%FBS 貼壁 成肌細胞樣

M017 tm3 小鼠睪丸間質(zhì)細胞 df12+5%hs+5%fbs 貼壁 上皮樣

M018 k7m2.wt 小鼠骨肉瘤成骨細胞 DMEM+10%FBS 貼壁 成骨細胞樣

M019 mc3t3 e1 小鼠胚胎成骨細胞前體細胞 DMEM+10% FBS 貼壁 成纖維細胞樣

M020 hepa1-6 小鼠肝癌細胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮樣

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