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教您這樣操作ELISA試劑盒實驗不會失利。
1.有的包被原可能不是蛋白，關于生物素和脂類物質或小分子物質咱們要事前對其改造再加以包被，我把辦法簡明的列出如下：
2.親和素生物素：先親和素先包被載體，參加生物素化的DNA，這種包被辦法均勻、結實，已擴展應用于各種抗原物質的定量測定。
3.小分子必需依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才干固定在固相載體上。包被原的性質很重要，蛋白濃度，是否降解，這聯(lián)系到你做出的抗體可不能夠 被其辨認，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時，師兄都嚴格正告我必定要在冰浴下緩慢消融就是這個道理。
4.脂類物質：可將其在有機溶劑中溶解后參加Elisa板孔中，開蓋置冰箱過夜或涼風吹干，待酒精蒸發(fā)后，讓脂質天然干固在固相外表。
5.應留心以下原理：由于蛋白質與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間 的作用，這種物理吸附長短特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易 吸附到固相載體外表。包被液的挑選，一般挑選ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時由于實驗的需求，包被原的特殊性也可能選用中性的緩沖溶液來包。 具體的實驗還要有堅固的理論外也要實踐，看一下可不能夠應用到自己實驗當中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有 pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
6.但選用什么，要根據(jù)實驗具體來實踐。常用封suo劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價廉，能夠高濃度使 用(5%－10%)；還有一些稀有用到的各種動物血清(首要為了排除相似蛋白攪擾)和酪蛋白等等。封suo就是讓大量不相關的蛋白質充填這些曠地閑暇， 然后排擠ELISA試劑盒后的過程中攪擾物質的再吸附。封suo：繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。
7.在洗板時會有必定誤差，人為因素很大(當然有條件的用洗板機在外)，洗的不*或串了孔，對如斯敏捷的ELISA體系但是不小的影響。由于 聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，為到達別離游離的和結合的酶符號物的意圖，鏟除殘留在板孔中游離的物質，以及非特異性地吸附的干 擾物質，在洗刷時又應把這種非特異性吸附的攪擾物質洗刷下來。洗刷板：能夠說在ELISA操作中，洗刷是zui首要的紐帶技能。
8.加抗體標本(和二抗)：留意該換槍頭時換槍頭。標本稀釋一般可用pbs稀釋，也可用封閉液去稀釋。如需加二抗，還要留意二抗的工作濃度，太低則上色淺。
9.顯色：顯色體系又許多，咱們一開始做的時候，要挑選適合的顯色體系。留意顯色體系酶活性底物的保存HRP結合物加硫柳泵，AP結合物可加 疊氮鈉。
10.每次做盡量要把陰陽空三個對照做好，如呈現(xiàn)問題也好分析。