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          人整合素αVβ3(ITG αⅤβ3)ELISA檢測試劑盒使用方法

          閱讀:244          發(fā)布時(shí)間:2019-2-19
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          人(Human)整合素αVβ3(ITG αⅤβ3)ELISA檢測試劑盒使用說明書
          檢測原理
          試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)
          先包被整合素αVβ3(ITG αⅤβ3)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、
          標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯
          色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成
          zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的整合素αVβ3(ITG αⅤβ3)呈正
          相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃
          度。
          樣品收集、處理及保存方法
          1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞
          刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地
          分離。
          2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
          3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
          4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘
          取上清。
          5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于
          -20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
          自備物品
          1. 酶標(biāo)儀(450nm)
          2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
          3. 37℃恒溫箱
          人(Human)整合素αVβ3(ITG αⅤβ3)ELISA檢測試劑盒操作注意事項(xiàng)
          1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的
          濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解
          后再使用。2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
          3. 濃度為0 的S0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白;按照說明
          書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5 倍,zui終結(jié)果乘以5 才是樣本實(shí)際濃度。
          4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
          5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
          試劑盒組成
          名稱 96孔配置 48孔配置 備注
          微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無
          標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無
          樣本稀釋液6mL 3mL 無
          檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
          20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進(jìn)行稀釋
          底物A 6mL 3mL 無
          底物B 6mL 3mL 無
          終止液6mL 3mL 無
          封板膜2 張2 張無
          說明書1 份1 份無
          自封袋1 個(gè)1 個(gè)無
          注:標(biāo)準(zhǔn)品(S0-S5)濃度依次為:0、4、8、16、32、64 ng/mL
          試劑的準(zhǔn)備
          20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20 稀釋,即1 份的20×洗滌緩
          沖液加19 份的蒸餾水。
          洗板方法
          1. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min 后甩盡
          孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5 次。
          2. 自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5 次。
          人(Human)整合素αVβ3(ITG αⅤβ3)ELISA檢測試劑盒操作步驟
          1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封
          袋密封放回4℃。
          2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
          3. 樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不
          加。
          4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶
          (HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴
          鍋或恒溫箱溫育60min。
          5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5 次(也可用洗板機(jī)洗板)。
          6. 每孔加入底物A、B 各50μL,37℃避光孵育15min。
          7. 每孔加入終止液50μL,15min 內(nèi),在450nm 波長處測定各孔的
          OD 值。
          結(jié)果判斷
          繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel 工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)
          OD 值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣
          本濃度值。
          試劑盒性能
          1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值,大于等于
          0.9900。
          2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0 ng/mL。
          3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
          4. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
          5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
          6. 有效期:6 個(gè)月
          免責(zé)聲明
          1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn),否則所
          產(chǎn)生的一切后果,由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),本公司概不負(fù)責(zé)。
          2. 嚴(yán)格按照說明書操作,實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作,后果由實(shí)驗(yàn)者
          承擔(dān)。

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