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          植物鐵氧還蛋白(FDX)酶聯(lián)免疫試劑盒的實驗原理

          閱讀:189          發(fā)布時間:2019-6-14
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          植物鐵氧還蛋白(FDX)酶聯(lián)免疫試劑盒說明書
          本試劑盒僅供研究使用。
          實驗原理
          本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物鐵氧還蛋白(FDX)水平。用純化的植物鐵氧還蛋白(FDX)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入植物鐵氧還蛋白(FDX),再與HRP標記的鐵氧還蛋白(FDX)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物鐵氧還蛋白(FDX)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中植物鐵氧還蛋白(FDX)濃度。
          組成
          130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
          2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(120ng/L)0.5ml×1瓶
          3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶
          4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
          5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
          6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個
          標本要求
          1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
          2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
          植物鐵氧還蛋白(FDX)酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟
          1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
          60ng/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
          30ng/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
          15ng/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
          7.5ng/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
          3.75ng/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
          2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
          3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
          4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
          5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
          6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
          7.溫育:操作同3。
          8.洗滌:操作同5。
          9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
          10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
          11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
          注意事項
          1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
          2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
          3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
          4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
          5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
          6.底物請避光保存。
          7.嚴格按照的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
          8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
          9.本試劑不同批號組分不得混用。
          植物鐵氧還蛋白(FDX)酶聯(lián)免疫試劑盒保存條件及有效期
          1.試劑盒保存:2-8℃。
          2.有效期:6個月

           

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