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          山羊脂聯(lián)素(ADP)elisa檢測試劑盒實驗原理

          閱讀:46          發(fā)布時間:2021-11-5
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          山羊脂聯(lián)素(ADP)elisa檢測試劑盒說明書



          試驗原理:

          TRH試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知TRH濃度的標(biāo)準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將TRH和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中TRH的濃度呈比例關(guān)系。

          試劑盒內(nèi)容及其配制

          試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制

          96/48人份酶標(biāo)板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型

          塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型

          標(biāo)準品:24ng/ml 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說明書進行稀稀

          空白對照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型

          標(biāo)準品稀釋緩沖液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型

          生物素標(biāo)記的抗TRH抗體 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型

          親和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型

          洗滌緩沖液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按說明書進行稀釋

          底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型

          底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型

          終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型

          山羊脂聯(lián)素(ADP)elisa檢測試劑盒自備材料

          1. 蒸餾水。

          2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

          3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

          安全性

          1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

          2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

          3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

          操作注意事項

          1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準品應(yīng)丟棄,不可保存。

          2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

          3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

          4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

          5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

          6. 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

          7. 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

          8. 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

          9. 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

          山羊脂聯(lián)素(ADP)elisa檢測試劑盒樣品收集、處理及保存方法

          1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

          2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

          3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

          4、 保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

          試劑的準備

          1. 標(biāo)準品:標(biāo)準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:

          24 ng/ml (6號標(biāo)準品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。

          12 ng/ml (5號標(biāo)準品) 100ul的原倍標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品稀釋液

          6.0 ng/ml (4號標(biāo)準品) 100ul的5號標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品稀釋液

          3.0 ng/ml (3號標(biāo)準品) 100ul的4號標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品稀釋液

          1.5 ng/ml (2號標(biāo)準品) 100ul的3號標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品稀釋液

          0.75 ng/ml (1號標(biāo)準品) 100ul的2號標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品稀釋液

          0 ng/ml (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

          2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

          操作步驟

          1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。

          2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

          3. 加入稀釋好后的標(biāo)準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

          4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

          5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

          6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

          7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

          8. 取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

          9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。

          山羊脂聯(lián)素(ADP)elisa檢測試劑盒建議使用的實驗方案

           標(biāo)準品濃度(ng/ml) 

          A 24 24 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

          B 12 12 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

          C 6.0 6.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

          D 3.0 3.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

          E 1.5 1.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

          F 0.75 0.75 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

          G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

          H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品


          局限

          6號標(biāo)準品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準曲線無法得到的結(jié)果。

          試劑盒性能

          1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

          2. 特異性:不與其它細胞因子反應(yīng)。

          3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

          結(jié) 果 判 斷 與 分 析

          1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

          2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的TRH標(biāo)準品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的TRH含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準曲線換算出相應(yīng)的濃度。

          3、檢測值范圍:0-24ng/ml

          4、敏感度: 0.1 ng/ml


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