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轉(zhuǎn)化細(xì)胞經(jīng)典轉(zhuǎn)染技術(shù)
閱讀：91 發(fā)布時(shí)間：2018-3-9轉(zhuǎn)化細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)的廣泛使用促進(jìn)了人們對(duì)外源基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)等方面的認(rèn)識(shí)，并在方法學(xué)上促進(jìn)了該領(lǐng)域及相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展。從磷酸鈣到脂質(zhì)體，到多胺，可用于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞種類已越來越多，轉(zhuǎn)染試劑也不斷更新?lián)Q代，而轉(zhuǎn)染也不再于將DNA轉(zhuǎn)入細(xì)胞中了，RNA，siRNA，蛋白質(zhì)等等生物大分子也進(jìn)入了轉(zhuǎn)染的行列。
DEAE-葡聚糖（Diethylaminoethyl (DEAE)-dextran）：這個(gè)早在1965年出現(xiàn)的轉(zhuǎn)染方法差不多是zui古董級(jí)的方法之一了，直到現(xiàn)在竟然還有少數(shù)人堅(jiān)持采用。帶正電的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚體可以結(jié)合帶負(fù)電的DNA分子，使得DNA復(fù)合物結(jié)合在帶負(fù)電的細(xì)胞表面。通過使用DMSO或甘油獲得的滲透休克，也可能是細(xì)胞內(nèi)吞作用，使得DNA復(fù)合體進(jìn)入細(xì)胞。DEAE-葡聚糖于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，可重復(fù)性好，轉(zhuǎn)染時(shí)要除掉血清。
磷酸鈣共沉淀轉(zhuǎn)染：zui早是在1973年開始采用的。氯化鈣＋DNA＋磷酸緩沖液按一定的比例混合，形成的極微小的磷酸鈣-DNA復(fù)合物沉淀粘附到細(xì)胞膜表面，借助內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。沉淀顆粒的大小和質(zhì)量對(duì)于轉(zhuǎn)染的成功至關(guān)重要，pH值，鈣離子濃度，DNA濃度，沉淀反應(yīng)時(shí)間，細(xì)胞孵育時(shí)間乃至各組分加入順序和混合的方式都可能對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響，重復(fù)性不佳。現(xiàn)在還會(huì)操作這種古董級(jí)方法的人怕已經(jīng)不多啦。比起DEAE法這個(gè)更容易得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，但是轉(zhuǎn)原代細(xì)胞比較困難的。
電穿孔法：通過短暫的高場(chǎng)強(qiáng)電脈沖處理細(xì)胞，沿細(xì)胞膜的電壓差異會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜暫時(shí)穿孔。DNA被認(rèn)為是穿過孔擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)。電脈沖和場(chǎng)強(qiáng)的優(yōu)化對(duì)于成功的轉(zhuǎn)染非常重要，因?yàn)檫^高的場(chǎng)強(qiáng)和過長的電脈沖時(shí)間會(huì)不可逆地傷害細(xì)胞膜而裂解細(xì)胞。理論上說轉(zhuǎn)化細(xì)胞電穿孔法可用于各種細(xì)胞，而且不需要另外采購特殊試劑。可是需要昂貴的設(shè)備——這個(gè)一次性投資可不便宜，而且每次轉(zhuǎn)染需要更多的細(xì)胞和DNA——因?yàn)榧?xì)胞死亡率高。每種細(xì)胞電轉(zhuǎn)的條件都需要進(jìn)行多次優(yōu)化。
125mg 298-59-9 鹽酸哌甲酯標(biāo)準(zhǔn)品
125mg 3105-68-8 鹽酸氟奮乃靜庚酸酯標(biāo)準(zhǔn)品
150mg Zileuton 111406-87-2 齊留通標(biāo)準(zhǔn)品
150mg Verapamil Related Compound F 1993/3/8 維拉帕米相關(guān)物質(zhì)F標(biāo)準(zhǔn)品
150mg Urea C 13 58069-82-2 尿酸C13標(biāo)準(zhǔn)品
150mg Topiramate 97240-79-4 托吡酯標(biāo)準(zhǔn)品
150mg misartan 144701-48-4 替米沙坦標(biāo)準(zhǔn)品
150mg Tacrolimus 109581-93-3 他克莫司標(biāo)準(zhǔn)品
150mg Succinylmonocholine Chloride 5297-17-6 氯琥珀酰單膽堿標(biāo)準(zhǔn)品
150mg Salsalate 552-94-3 雙水楊酸酯標(biāo)準(zhǔn)品
150mg Salmeterol Xinafoate 94749-08-3 昔美酸沙美特羅標(biāo)準(zhǔn)品
轉(zhuǎn)化細(xì)胞