詳細(xì)介紹
腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞;AAV-293圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞;AAV-293圖片
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 我們推薦使用AAV-293細(xì)胞株繁殖腺病毒相關(guān)重組病毒。 AAV-293源自普遍使用的 HEK293細(xì)胞株,但產(chǎn)生的病毒滴度更高。 HEK293細(xì)胞是剪切過(guò)的腺病毒5型DNA轉(zhuǎn)染的人胚腎細(xì)胞。 跟HEK293細(xì)胞一樣,AAV-293細(xì)胞反式表達(dá)腺病毒E1基因,當(dāng)共轉(zhuǎn)染三個(gè)AAV助質(zhì)粒(一個(gè)含ITR的質(zhì)粒,pAAV-RC, 和E1缺失助質(zhì)粒)時(shí),可以產(chǎn)生有感染力的腺病毒-相關(guān)病毒顆粒。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 P(10+5)
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR Amelogenin:X;CSF1PO:7,11,12;D13S317:12;D16S539:9,13;D18S51:17,18;D19S433:15,18;D21S11:28,30.2;D2S1338:19;D3S1358:15,17;D5S818:8,9;D7S820:11;D8S1179:12,14;FGA:23;TH01:7,9.3;TPOX:11;vWA:16,19
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
糖原Ⅲ型 500mg
陶瓷研缽 ( 直徑 60 mm) 1個(gè)
陶瓷研缽 ( 直徑 75 mm) 1個(gè)
天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶 500 U
天凈沙 DNA 甲基化修飾試劑盒 150 次
天凈沙 Ribo-SPIA cDNA 擴(kuò)增試劑盒 20 次
天凈沙 SPIA 擴(kuò)增試劑盒 ( 用于擴(kuò)增 DNA 模板 ) 20 次
天凈沙單細(xì)胞 RNA 擴(kuò)增試劑盒 80 次
天凈沙非同位素探針雜交試劑盒 5次
天凈沙非同位素探針雜交試劑盒 5次
天凈沙核酸濃縮劑 30mL
天凈沙甲基化 PCR 2.0 試劑盒 150 次
天凈沙鎳柱原位再生試劑盒 20 次
天凈沙通用型MLPA 試劑盒 20 次
天凈沙細(xì)胞蛋白質(zhì) -RNA 雙提取試劑盒 50 次
天狼猩紅 5g
天門(mén)冬酰胺酶 250UAFC[7-氨基-4-三氟甲基香豆素] 熒光參照標(biāo)準(zhǔn)AFC [7-Amino-4-trifluoromethylcoumarin] Fluorescence reference standard
6-TAMRA, SE [6-羧基四甲基羅丹明,琥珀酰亞胺酯] 可標(biāo)記寡核苷酸6-TAMRA, SE [6-Carboxytetramethylrhodamine, succinimidyl ester] Validated for labeling oligos
TQ3 馬來(lái)酰亞胺Tide Quencher 3 maleimide [TQ3 maleimide]
5/6-TAMRA標(biāo)記的Asp天冬氨酸FMOC-Asp(5/6-TAMRA)-OH
二肽酰多肽酶IV (DPPIV)熒光底物Gly-Pro-AMCGly-Pro-AMC
Pluronic F-127 20%溶液于DMSO中Pluronic F-127 20% solution in DMSO
pH熒光探針BCBCF酸BCBCF acid
5(6)-FAM氨基磷酸酯5(6)-FAM Phosphoramidite
FMOC-4,5-dehydro-L-Leu-OHFMOC-4,5-dehydro-L-Leu-OH
鬼筆環(huán)肽-iFluor 594偶聯(lián)物Phalloidin-iFluor 594 Conjugate
Cyanine 3酰肼 [相當(dāng)于Cy3酰肼]Cyanine 3 hydrazide [equivalent to Cy3 hydrazide]
FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMKFITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK
Cal-520 馬來(lái)酰亞胺Cal-520 maleimide
2C-T-2 (hydrochloride) (50 mg)4-(ethylthio)-2,5-dimethoxy-benzeneethanamine, monohydrochloride; 2,5-Dimethoxy-4-ethylthiophenethylamine; 2C-T-2 (hydrochloride)
Prostaglandin D1 (10 mg)9。alpha。,15S-dihydroxy-11-oxo-prost-13E-en-1-oic acid; PGD1; Prostaglandin D1
Canertinib (hydrochloride) (25 mg)N-[4-[(3-chloro-4-fluorophenyl)amino]-7-[3-(4-morpholinyl)propoxy]-6-quinazolinyl]-2-propenamide, dihydrochloride; CI 1033|PD 183805; Canertinib (hydrochloride)
2-methyl Benzamideoxime (1 g)(Z)-N’-hydroxy-2-methylbenzimidamide; 2-methyl Benzamideoxime
2-(4-Pyridyl)-4-methyl-thiazole-5-Carboxylic Acid (100 mg)4-methyl-2-(4-pyridinyl)-5-thiazolecarboxylic acid; 2-(4-Pyridyl)-4-methyl-thiazole-5-Carboxylic Acid
天然蛋白 A 1mg
甜菜堿 10g
甜菜堿溶液,5M,PCR 1.5mL
甜菜堿鹽酸鹽 100g
填入法 DNA 末端標(biāo)記試劑盒 A 5次