詳細介紹
人正常前列腺基質(zhì)永生化細胞;WPMY-1圖片【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人正常前列腺基質(zhì)永生化細胞;WPMY-1圖片
形態(tài)特性 成肌細胞
生長特性 貼壁生長
特征特性 肌成纖維基質(zhì)細胞株, WPMY-1, 與RWPE-1 cells (ATCC CRL-11609)一樣,來源于同一張成人前列腺組織切片的周圍區(qū)域的基質(zhì)細胞。 通過一個pRSTV質(zhì)料結(jié)構(gòu),用SV40大T抗原對基質(zhì)細胞進行永生化。 WPMY-1細胞,與RWPE-1細胞及其它上皮細胞衍生株一樣,屬于來源于同一個前列腺的一系列細胞株。 由于它們來源于同一個前列腺的周圍區(qū)域,WPMY-1細胞株對于研究分泌和基質(zhì)與上皮細胞相互作用尤其有用。 據(jù)提供者報道,來源于同一個前列腺的RWPE-1細胞株(ATCC CRL-1
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,5%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 P(41+5)
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。 細胞到達客戶手中,1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
微型離心管研磨杵 ( 有離心管 ) 50 套
維生素 B1 10g
維生素 B12 1g
維生素 B6 5g
維生素 C 測試盒 48 T
維生素 D3 1g
維生素 E 5g
胃蛋白酶 250mg
胃蛋白酶 1:10000 10g
胃蛋白酶 1:3000 5g
胃蛋白酶測試盒 24 T
胃蛋白酶抑制劑 5mg
胃蛋白酶抑制劑溶液,1 mg/mL 1mL
胃粘膜素 100mg
蝸牛酶干粉 5g
無 RNase 的 DNase 溶液 ,1U/μL 300U
無包被磁珠 2mL
無機焦磷酸酶 ( 酵母 ) 10U
無機焦磷酸酶,熱穩(wěn)定 250U
無脊椎動物種屬鑒定 PCR Mix 100 次
19(R)-hydroxy Prostaglandin F2α (50 ug)9α,11α,15S,19R-tetrahydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid; 19
Cell-Based Assay Buffer (10X) (50 ml)Cell-Based Assay Buffer (10X)
Laemmli Buffer Stock Solution (2X) (25 mL)Laemmli Buffer Stock Solution (2X)
Dihomo-γ-Linolenoyl PAF C-16 (10 mg)1-O-hexadecyl-2-O-(8Z,11Z,14Z-eicosatrienoyl)-sn-glyceryl-3-phosphorylcholine; 1-O-hexadecyl-2-dihomo-γ-Linolenoyl-sn-glycero-3-Phosphocholine; Dihomo-γ-Linolenoyl PAF C-16
2-Arachidonoyl Glycerol (10 mg)5Z,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenoic acid, 2-glyceryl ester; 2-AG; 2-Arachidonoyl Glycerol
1-Oleoyl-2-acetyl-sn-glycerol (100 mg)1-O-9Z-octadecenoyl-2-O-acetyl-sn-glycerol; OAG; 1-Oleoyl-2-acetyl-sn-glycerol
Xestospongin C (1 mg)[1R-(1R,4aR,11R,12aS,13S,16aS,23R,24aS)]-eicosahydro-5H,17H-1,23:11,13-diethano-2H,14H-[1,11]dioxacycloeicosino[2,3-b:12,13-b1]dipyridine; XeC|Araguspongine E; Xestospongin C
G6PDH Enzyme Mixture (1 ea)G6PDH Enzyme Mixture
SPHK Assay Cofactor Mixture (1 ea)SPHK Cofactor Mixture; SPHK Assay Cofactor Mixture
β-HB Developing Enzyme (1 ea)β-HB Developing Enzyme
Sesamin (1 mg)[1S-(1α,3aα,4α,6aα)]-5,5’-(tetrahydro-1H,3H-furo[3,4-c]furan-1,4-diyl)bis-1,3-benzodioxole; Sesamin
無內(nèi)毒素槍頭,1 mL 1盒
無內(nèi)毒素槍頭,200 μL 1盒
無內(nèi)毒素水 50mL
無內(nèi)毒素螢火蟲熒光素 25mg