詳細(xì)介紹
人胚腎細(xì)胞(SV40T基因修飾);293T/17價(jià)格質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
人胚腎細(xì)胞(SV40T基因修飾);293T/17價(jià)格操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 293細(xì)胞株插入SV40 T-抗原的溫度敏感基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生株稱為293T。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 消化5-15分鐘。1:4-1:8。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 P(17+5)
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
細(xì)胞表面蛋白分離試劑盒 8次
細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V- 熒光素 594) 20 次
細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V- 熒光素 594) 50 次
細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V-APC) 20 次
細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V-APC) 50 次
細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V-PE) 20 次
細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V-PE) 50 次
細(xì)胞核蛋白提取試劑盒 50 次
細(xì)胞核微量制備試劑盒 50 次
細(xì)胞計(jì)數(shù)液 (Vi-CELL 儀 ) 100 次
細(xì)胞色素 C 100mg
細(xì)胞松弛素 B 1mg
細(xì)胞松弛素 B 溶液 ,20mg/mL 0.1mL
細(xì)胞周期與凋亡檢測(cè)試劑盒(PI 法) 50 次
細(xì)胞株系列 --
JWH 398 7-chloronaphthyl isomer (5 mg)(7-chloronaphthalen-1-yl)(1-pentyl-1H-indol-3-yl)methanone; JWH 398 7-chloronaphthyl isomer
JWH 210 6-ethylnaphthyl isomer (10 mg)(6-ethylnaphthalen-1-yl)(1-pentyl-1H-indol-3-yl)methanone; JWH 210 6-ethylnaphthyl isomer
bk-DMBDB (hydrochloride) (50 mg)1-(1,3-benzodioxol-5-yl)-2-(dimethylamino)-1-butanone, monohydrochloride; Dibutylone; bk-DMBDB (hydrochloride)
Arachidonic Acid methyl ester (250 mg)5Z,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenoic acid, methyl ester; Methyl Arachidonate; Arachidonic Acid methyl ester
Eicosatetraynoic Acid (25 mg)5,8,11,14-eicosatetraynoic acid; ETYA; Eicosatetraynoic Acid
Oleoyl Ethanolamide (5 mg)N-(2-hydroxyethyl)-9Z-octadecenamide; OEA|Oleic Acid Ethanolamide; Oleoyl Ethanolamide
5(S),6(R)-Lipoxin A4 (250 ug)5S,6R,15S-trihydroxy-7E,9E,11Z,13E-eicosatetraenoic acid; 5(S),6(R),15(S)-TriHETE|5(S),6(R)-LXA4; 5(S),6(R)-Lipoxin A4
RCS-4 M11 metabolite (5 mg)5-(3-(4-hydroxybenzoyl)-1H-indol-1-yl)pentan-2-one; RCS-4 N-(4-oxo-pentyl)phenol metabolite; RCS-4 M11 metabolite
Clozapine (500 mg)8-chloro-11-(4-methyl-1-piperazinyl)-5H-dibenzo[b,e][1,4]diazepine; Azaleptin|HF 1854|Fazaclo|Iprox|Sizopin; Clozapine
IDE2 (5 mg)1-(2-cyclopentylidenehydrazide)-heptanedioic acid; IDE2
ML-265 (1 mg)6-
細(xì)菌 DNAout 250 次
細(xì)菌 DNAout 50 次
細(xì)菌 RNAout 100 次
細(xì)菌 RNAout 250 次
細(xì)菌蛋白酶抑制劑 10mL
細(xì)菌膜蛋白質(zhì)微量提取試劑盒 50 次