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EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞（彝族）；KM934圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞（彝族）；KM934圖片
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞系來自一成年彝族男性的外周血，中國科學(xué)院昆明細(xì)胞庫于1993年通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代；5-6天一次
傳代情況 P10
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
一站式大提柱式 miRNAout 5次
一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 低 pH) 30 次
一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 高 pH) 30 次
一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 中 pH) 30 次
一站式動物 mRNAout 25 次
一站式平末端克隆試劑盒 20 次
一站式全血 mRNAout 25 次
一站式生物素 TUNEL 試劑盒 (FITC/POD) 10 次
一站式生物素檢測 TUNEL 試劑盒 (DAB 法 ) 10 次
一站式乙酸 - 尿素 PAGE 電泳套裝 30 次
一站式長效期 SDS-PAGE 電泳套裝 (>30KD) 30 次
一站式長效期 SDS-PAGE 電泳套裝 (2-30KD) 30 次
一站式真菌 mRNAout 25 次
一站式植物 mRNAout 25 次
一站式柱式 miRNAout 50 次
伊紅 Y 二鈉鹽，水溶性 10g三水FeNaEDTA（100GM）FeNaEDTA， 3H2O， CAS# 15708-41-5； MW 421.1
無水硫酸鎂（5KG）Magnesium Sulfate， Anhydrous， CAS# 7487-88-9； ≥98%
碳酸氫鈉溶液（100ML）Sodium Bicarbonate Solution， 7.5% solution （75 mg/ml） in purified water. Sterile filtered.
硫酸慶大霉素（1GM）Gentamicin Sulfate， USP Grade； CAS Number: 1405-41-0.
AMC[7-氨基-4-甲基香豆素] 可標(biāo)記多肽AMC [7-Amino-4-methylcoumarin] Validated for labeling peptides
6-TAMRA， SE [6-羧基四甲基羅丹明，琥珀酰亞胺酯] 單體6-TAMRA， SE [6-Carboxytetramethylrhodamine， succinimidyl ester] Single isomer
TQ3 胺Tide Quencher 3 amine [TQ3 amine]
5-FAM標(biāo)記的Asp天冬氨酸FMOC-Asp（5-FAM）-OH
酪蛋白，TAMRA標(biāo)記Casein， TAMRA-conjugated
Pluronic F-127 細(xì)胞培養(yǎng)檢測Pluronic F-127 Cell culture tested
pH熒光探針 PDMPORatioWorks PDMPO
6-TEX氨基磷酸酯[5’-四氯熒光素氨基磷酸酯]6-TET phosphoramidite [5’-Tetrachlorofluorescein phosphoramidite]
DSG [Di（N-succinimidyl） glutarate]DSG [Di（N-succinimidyl） glutarate]
鬼筆環(huán)肽-iFluor 555偶聯(lián)物Phalloidin-iFluor 555 Conjugate
Cyanine 3胺 [相當(dāng)于Cy3胺]Cyanine 3 amine [equivalent to Cy3 amine]
伊紅 Y, 溶性 10g
衣霉素 5mg
衣霉素溶液 ,5mg/mL 1mL
胰蛋白胨 500g
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