詳細(xì)介紹
dCTP 溶液,100mM0.5mL實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
dCTP 溶液,100mM0.5mL實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品介紹:
規(guī)格及成分:
使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
3. 電泳檢測是否得到預(yù)計(jì)長度的 PCR 產(chǎn)物。
pSMART HCAmp
pSV3-dhfr(pSV3dhfr)
pTagYFP-N(pTagYFPN)
pTracer-EF/V5-His B(pTracerEFV5HisB)
pTurboGFP-N(pTurboGFPN)
pUltra-hot
pVT66
pYC2-E(pYC2E)
RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen1(RNAiReadypSIRENRetroQZsGreen1)
V181 pLPS 3' Triple-Flag - Acceptor(V181pLPS3'TripleFlagAcceptor)
YEp358
YRp15-leu2delta1(YRp15leu2delta1)
陶瓷研缽(直徑75 mm)豌豆根瘤菌 Rhizobium leguminosarum
MGC80-3(MGC-803)人胃細(xì)胞gersion
地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis
青霉菌 Penicillium sp.
人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
普通變形桿菌 Proteus vulgaris
膠韌革菌 Gloeostereum incarnatum
中性紅染色液規(guī)格:100ml
大鼠甲狀腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
屎腸球菌 Enterococcus faecium
中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii
NCI-H23(人非小細(xì)胞肺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
桿菌屬 Lactobacillus sp.
無花果曲霉 Aspergillus ficuum
靈芝 Ganoderma lucidium
褐球固氮菌 Azotobacter chrooccum
豬胃消化粉
Alkalophilic halophile medium
Bacillus thermantarcticus medium
Caminibacter mediatlanticus medium
Clostridium sticklandii medium
Desulfobacterium cetonicum medium
Desulfuromonas medium (tce)