詳細(xì)介紹
即用型高保真 PCR 試劑盒9mL成分產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
即用型高保真 PCR 試劑盒9mL成分產(chǎn)品介紹:
規(guī)格及成分:
使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
3. 電泳檢測是否得到預(yù)計長度的 PCR 產(chǎn)物。
L3788
lambda FIX II
MBP-mOrange(MBPmOrange)
p3xFLAG-CMV-10(p3xFLAGCMV10)
pAcGP67-A(pAcGP67A)
pAG423GPD-ECFP-ccdB(pAG423GPDECFPccdB)
pARC7
pBAD202/D/LacZ(pBAD202DLacZ)
pBiFC-bFos(deltaZIP)VC155(pBiFCbFosdeltaZIPVC155)
pBPV-1 8-2(pBPV1 8-2)
pCAMBIA1291Z釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
涇陽鏈霉菌 Streptomyces jingyangensis
P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1] (小鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
植物桿菌 Lactobacillus plantarum
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
Ni-Agarose His標(biāo)簽蛋白純化試劑盒5ml、2ml國產(chǎn)gersion
嗜酸桿菌 Lactobacillus acidophilus
科恩根霉
人結(jié)腸細(xì)胞英文名稱:LS174T
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
哈茨木霉 Mesorhizobium huakuii
印第安那亞種 Bacillus thuringiensis subsp. indiana
大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
宇佐美曲霉 Aspergillus usamii
香菇 Lentinula edodes
10%SDS溶液100ml國產(chǎn)
銅綠假單胞菌 Pseudomonas aeruginosa
pcDNA3.1(+)/myc-His A(pcDNA3.1mycHisA)
pcDNA6/TR(pcDNA6TR)(60908-1740)
pCMV-BD(pCMVBD)(60908-1970)
pCMV6-AC-IRES-GFP(pCMV6ACIRESGFP)
pcos2EMBL
pDB.His.NusA
pDream2.1/MCS(pDream2.1MCS)
pECFP-N1(pECFPN1)(60908-2550)
pESC-HIS(pESCHIS)(60908-2751)