詳細(xì)介紹
Real-Time PCR 稀釋液1mL成分產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
Real-Time PCR 稀釋液1mL成分產(chǎn)品介紹:
規(guī)格及成分:
使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
3. 電泳檢測(cè)是否得到預(yù)計(jì)長度的 PCR 產(chǎn)物。
Methylosarcina quisquillarum and m. Fibrata medium
Modified th agar
Organic medium 79
Psychrilyobacter sp. Medium
Roseinatronobacter monicus medium
Spirochaeta zuelzerae medium
SYP medium
Thermotoga petrophila medium
Trypticase soy yeast extract medium
Zymomonas medium
大腸桿菌JM109菌種
293A細(xì)胞株
BE(2)-M17細(xì)胞株
COC1細(xì)胞株
HCT-8/FU [HCT8FU]細(xì)胞株
KG-1 [KG1]細(xì)胞株
MLTC-1 [MLTC1]細(xì)胞株HuT 78(人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe
香菇 Lentinula edodes
人子宮內(nèi)膜細(xì)胞英文名稱:Ishikawa
人胃粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
五通橋毛霉 Mucor wutungkiao
短短芽胞桿菌 Brevibacillus brevis
GST標(biāo)簽蛋白裂解液20 ug20μg、100μg
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
中國臺(tái)灣根霉
人腎上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
SP2/0, 小鼠骨髓瘤細(xì)胞
嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilus
香菇 Lentinula edodes
Calu-6(人肺退行性細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
白色鏈孢囊菌 Streptosporangium album