詳細介紹
ROX 參考染料200μL特點使用方法:
1. 以 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
3. 電泳檢測是否得到預計長度的 PCR 產(chǎn)物。
ROX 參考染料200μL特點產(chǎn)品及特點:
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴增。
ROX 參考染料200μL特點產(chǎn)品介紹:
ROX 參考染料200μL特點規(guī)格及成分:
P388D1(IL-L)細胞株
SGC-7901 [SGC7901]細胞株
V79細胞株
乳酸測試盒(測血清、組織等)
血液DNAout(150次)
分枝桿菌DNAout
柱式內(nèi)毒素清除劑
柱式石蠟包埋組織DNAout2.0(二代測序)
一管式病毒DNAout(200次)
微量單鏈DNA定量試劑盒樣品預處理
植物DNAout
柱式質(zhì)粒DNAout(50次)
核酸上樣液
微量DNA助沉劑
柱式探針純化試劑盒
dNTP和引物清除劑
全基因組擴增(WGA)人脈絡膜微血管細胞*培養(yǎng)基100mL
小鼠成纖維細胞(EGFP標記)
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
黑化鏈霉菌 Streptomyces nigrificans
A549, 人肺細胞系
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
玉蜀黍赤霉 Gibberella zeae
人肺細胞英文名稱:Calu-1
EPC, 大鼠血管內(nèi)皮祖細胞 Rattus
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
膠凍樣芽胞桿菌 Bacillus mucilaginosus
I型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL
橢圓釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae var.ellipsoideus
自養(yǎng)黃色桿菌 Xanthobacter autotrophicus
BT-20(人腺細胞)5×106cells/瓶×2
地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis
三葉草根瘤菌 Rhizobium trifolii
ROX 參考染料200μL特點SW 1353(人骨肉瘤細胞)5×106cells/瓶×2
克必隆B載體
釀酒酵母EGY48感受態(tài)細胞
可保種型藍白T載體
釀酒酵母AH109感受態(tài)細胞