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          一步式 RT-PCR Mix 1mL實驗步驟

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          • 一步式 RT-PCR Mix 1mL實驗步驟

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          • 所在地 上海市

          在線詢價 收藏產(chǎn)品 加入對比 查看聯(lián)系電話

          更新時間:2017-02-09 20:52:07瀏覽次數(shù):548

          聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

          產(chǎn)品簡介

          一步式 RT-PCR Mix 1mL實驗步驟運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存, 有效期為一年。

          詳細介紹

          一步式 RT-PCR Mix 1mL實驗步驟產(chǎn)品及特點:

          易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
          1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
          2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
          3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
          4. 可用于連續(xù)易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
          5. 只適用于擴增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴增。 
          一步式 RT-PCR Mix 1mL實驗步驟產(chǎn)品介紹:

          規(guī)格及成分:

          使用方法:
          1. 以 30 uL 的標準 PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補水到 30 uL
          2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
          3. 電泳檢測是否得到預計長度的 PCR 產(chǎn)物。

          葡聚糖凝膠G-25 中顆粒
          吐溫-80
          乙烯利
          Bianiline(對二氨基聯(lián)苯、4,4′-二氨基聯(lián)苯、聯(lián)苯胺)
          APES-丙酮包被液
          乙酸溶液,0.5%(v/v)
          多聚甲醛(0.1M 磷酸緩沖液,pH7.4)溶液,0.5%
          Mayer蘇木精染色液
          Masson三色改良法結(jié)締組織染色試劑盒
          Pischinger緩沖亞甲藍法神經(jīng)組織染色試劑盒
          甲苯胺藍染色法特殊細胞染色試劑盒
          蘇丹Ⅳ染色法脂類物質(zhì)染色試劑盒
          Karnovsky-Roots鐵氰化銅法膽堿酯酶顯色試劑盒
          Twort-Ollett革蘭法細菌染色試劑盒
          Beta-ME-EDTA Solution(beta-巰基乙醇-EDTA溶液)
          Casein Blocking Buffer in PBS with azide(酪蛋白封堵劑)
          EGTA Solution(EGTA溶液),1M,pH8.0孢蘑菇
          敘利亞倉鼠腎細胞英文名稱:BHK
          小鼠頜下腺上皮細胞*培養(yǎng)基100mL
          戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus
          香菇 Lentinula edodes
          801-D (人巨細胞性肺細胞)5×106cells/瓶×2
          糖化酵母 Saccharomyces diastaticus
          苜蓿中華根瘤菌
          RL95-2(人子宮內(nèi)膜細胞)5×106cells/瓶×2
          繩狀青霉 Penicillium funiculosum
          苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
          人前脂肪細胞*培養(yǎng)基100mL
           細胞名稱 種屬
          釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
          臘狀芽胞桿菌 Bacillus cereus
          小鼠小梁網(wǎng)細胞*培養(yǎng)基100mL
          彎曲桿菌 Lactobacillus curvatus
          香菇 Lentinula edodes
          HEPES Buffer,1M,pH7.6
          Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH3.5
          MOPSO Buffer,0.2M,pH7.0
          Phosphate Citrate Buffer,2X

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