詳細介紹
一步式 RT-PCR Mix 1mL實驗步驟產(chǎn)品及特點:
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴增。
一步式 RT-PCR Mix 1mL實驗步驟產(chǎn)品介紹:
規(guī)格及成分:
使用方法:
1. 以 30 uL 的標準 PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
3. 電泳檢測是否得到預計長度的 PCR 產(chǎn)物。
葡聚糖凝膠G-25 中顆粒
吐溫-80
乙烯利
Bianiline(對二氨基聯(lián)苯、4,4′-二氨基聯(lián)苯、聯(lián)苯胺)
APES-丙酮包被液
乙酸溶液,0.5%(v/v)
多聚甲醛(0.1M 磷酸緩沖液,pH7.4)溶液,0.5%
Mayer蘇木精染色液
Masson三色改良法結(jié)締組織染色試劑盒
Pischinger緩沖亞甲藍法神經(jīng)組織染色試劑盒
甲苯胺藍染色法特殊細胞染色試劑盒
蘇丹Ⅳ染色法脂類物質(zhì)染色試劑盒
Karnovsky-Roots鐵氰化銅法膽堿酯酶顯色試劑盒
Twort-Ollett革蘭法細菌染色試劑盒
Beta-ME-EDTA Solution(beta-巰基乙醇-EDTA溶液)
Casein Blocking Buffer in PBS with azide(酪蛋白封堵劑)
EGTA Solution(EGTA溶液),1M,pH8.0孢蘑菇
敘利亞倉鼠腎細胞英文名稱:BHK
小鼠頜下腺上皮細胞*培養(yǎng)基100mL
戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus
香菇 Lentinula edodes
801-D (人巨細胞性肺細胞)5×106cells/瓶×2
糖化酵母 Saccharomyces diastaticus
苜蓿中華根瘤菌
RL95-2(人子宮內(nèi)膜細胞)5×106cells/瓶×2
繩狀青霉 Penicillium funiculosum
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
人前脂肪細胞*培養(yǎng)基100mL
細胞名稱 種屬
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
臘狀芽胞桿菌 Bacillus cereus
小鼠小梁網(wǎng)細胞*培養(yǎng)基100mL
彎曲桿菌 Lactobacillus curvatus
香菇 Lentinula edodes
HEPES Buffer,1M,pH7.6
Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH3.5
MOPSO Buffer,0.2M,pH7.0
Phosphate Citrate Buffer,2X