EGY48 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL*規(guī)格及成分：

EGY48 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL*產(chǎn)品及特點(diǎn)：

本產(chǎn)品是采用特殊工藝處理得到的大腸桿菌 DH10 Bac 感受態(tài)細(xì)胞，適用于昆蟲(chóng)桿狀病毒 Bac-to-Bac 系統(tǒng)中同源重組的菌株，用于產(chǎn)生重組 Bacmid。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，本產(chǎn)品轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107CFU/μg。 DH10Bac 細(xì)胞包含親本 Bacmid bMON14272 和輔助質(zhì)粒 pMON7124。親本 Bacmid 包含一個(gè) mini-F 復(fù)制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位點(diǎn)和 lac Zα-互補(bǔ)因子。輔助質(zhì)粒包含 tns ABCD 區(qū)域，該區(qū)域提供了 mini-Tn7 從供體質(zhì)粒插入親本 Bacmid 靶位點(diǎn)所需要的轉(zhuǎn)座蛋白。供體如 pFastBac 系列質(zhì)粒（pFastBac1，pFastBacDual 等）含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重組臂，Tn7R 和 Tn7L 之間包含慶大霉素抗性基因、昆蟲(chóng)病毒多角體基因啟動(dòng)子、多克隆位點(diǎn)和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信號(hào)。當(dāng)含有靶基因 pFastBac 的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到 DH10Bac 細(xì)胞后，發(fā)生重組后就可產(chǎn)生重組 Bacmid，提取純化重組 Bacmid 轉(zhuǎn)染昆蟲(chóng)細(xì)胞 Sf9 或 Sf21 就可以包裝產(chǎn)生昆蟲(chóng)病毒。此外，DH10Bac 細(xì)胞中的 The φ80dlacZDM15 基因的產(chǎn)物可以實(shí)現(xiàn)β-半乳糖苷酶的α-互補(bǔ)現(xiàn)象，用于重組 bacmid 的藍(lán)白斑篩選。菌株基因型為：F- mcrA Δ(mrrhsdRMSmcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG/pMON14272/pMON7124 。
EGY48 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL*使用方法：
1. 制備含有如下抗生素的 LB 固體平板：50 μ g/mL Kanamycin，7 μ g/mL gentamicin，10 μg/mL tetracycline，100 μg/mL X-gal，40 μg/mL IPTG。
2. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100 μL，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞為例。
3. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入 1-10 ng 重組質(zhì)粒，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴 30 分鐘。
4. 42℃熱擊 90 秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘。
5. 每個(gè)離心管中加入 900 μL 無(wú)菌的 SOC（不含抗生素），混勻后置于 37℃ 搖床， 200rpm 振蕩培養(yǎng) 4 小時(shí)。
6. 用 SOC 培養(yǎng)基進(jìn)行 10 倍梯度稀釋，如分成 3 個(gè)稀釋梯度 10-1,10-2,10-3。
7. 取 100 μL 的各個(gè)梯度的培養(yǎng)物用于涂布。等平板中的液體*吸收后，倒置平板， 37℃培養(yǎng) 24-48 小時(shí)。 8. 保留剩余的菌液保存于 4℃，視平板上菌落生長(zhǎng)情況決定去留。

蘇云金芽胞桿菌以色列亞種 Bacillus thuringiensis subsp. israelensis
大鼠視網(wǎng)膜muller細(xì)胞100mL
榆黃蘑 Pleurotus citrinopileatus
香菇 Lentinula edodes
16HBE(人支氣管上皮樣細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
銅綠假單胞菌 Pseudomonas aeruginosa
苜蓿中華根瘤菌
QSG-7701(人正常肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2gersion
嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilus
多孢木霉
屎腸球菌 Enterococcus faeciumpUCATPH
pVP33A
pXP618
pZsYellow
TOPFlash
YCplac22
YIp367R
DNA樣品采樣拭子
氯蛋白胨緩沖液
Alcanivorax borkumensis medium
Aurantimonas manganoxydans medium
C/10 medium
Clostridium chartatabidum medium
Deinococcus medium
Desulfovibrio medium (choline)
Ferriphaselus (es) medium
Half strength bacto marine broth
香菇 Lentinula edodes
CoC1/DDP(人卵巢耐藥細(xì)胞亞株)5×106cells/瓶×2
EGY48 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL*釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
馬杜拉放線菌 Actinomadura Sp.
人胚肺成纖維細(xì)胞英文名稱：KMB17
MN-s, 小鼠紋狀體神經(jīng)元
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae