詳細(xì)介紹
NMY51 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL現(xiàn)貨產(chǎn)品及特點(diǎn):
本產(chǎn)品是采用特殊工藝處理得到的大腸桿菌 DH10 Bac 感受態(tài)細(xì)胞,適用于昆蟲(chóng)桿狀病毒 Bac-to-Bac 系統(tǒng)中同源重組的菌株,用于產(chǎn)生重組 Bacmid。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè),本產(chǎn)品轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107CFU/μg。 DH10Bac 細(xì)胞包含親本 Bacmid bMON14272 和輔助質(zhì)粒 pMON7124。親本 Bacmid 包含一個(gè) mini-F 復(fù)制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位點(diǎn)和 lac Zα-互補(bǔ)因子。輔助質(zhì)粒包含 tns ABCD 區(qū)域,該區(qū)域提供了 mini-Tn7 從供體質(zhì)粒插入親本 Bacmid 靶位點(diǎn)所需要的轉(zhuǎn)座蛋白。供體如 pFastBac 系列質(zhì)粒(pFastBac1,pFastBacDual 等)含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重組臂,Tn7R 和 Tn7L 之間包含慶大霉素抗性基因、昆蟲(chóng)病毒多角體基因啟動(dòng)子、多克隆位點(diǎn)和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信號(hào)。當(dāng)含有靶基因 pFastBac 的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到 DH10Bac 細(xì)胞后,發(fā)生重組后就可產(chǎn)生重組 Bacmid,提取純化重組 Bacmid 轉(zhuǎn)染昆蟲(chóng)細(xì)胞 Sf9 或 Sf21 就可以包裝產(chǎn)生昆蟲(chóng)病毒。此外,DH10Bac 細(xì)胞中的 The φ80dlacZDM15 基因的產(chǎn)物可以實(shí)現(xiàn)β-半乳糖苷酶的α-互補(bǔ)現(xiàn)象,用于重組 bacmid 的藍(lán)白斑篩選。菌株基因型為:F- mcrA Δ(mrrhsdRMSmcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG/pMON14272/pMON7124 。
NMY51 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL現(xiàn)貨規(guī)格及成分:
NMY51 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL現(xiàn)貨使用方法:
1. 制備含有如下抗生素的 LB 固體平板:50 μ g/mL Kanamycin,7 μ g/mL gentamicin,10 μg/mL tetracycline,100 μg/mL X-gal,40 μg/mL IPTG。
2. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100 μL,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞為例。
3. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入 1-10 ng 重組質(zhì)粒,用移液器輕輕吹打混勻,冰浴 30 分鐘。
4. 42℃熱擊 90 秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置 2-3 分鐘。
5. 每個(gè)離心管中加入 900 μL 無(wú)菌的 SOC(不含抗生素),混勻后置于 37℃ 搖床, 200rpm 振蕩培養(yǎng) 4 小時(shí)。
6. 用 SOC 培養(yǎng)基進(jìn)行 10 倍梯度稀釋?zhuān)绶殖?3 個(gè)稀釋梯度 10-1,10-2,10-3。
7. 取 100 μL 的各個(gè)梯度的培養(yǎng)物用于涂布。等平板中的液體*吸收后,倒置平板, 37℃培養(yǎng) 24-48 小時(shí)。 8. 保留剩余的菌液保存于 4℃,視平板上菌落生長(zhǎng)情況決定去留。
鏈霉菌 Streptomyces sp.
Annexin V-FITC/PI雙染法細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒規(guī)格:100次
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
大孢綠僵菌=金龜子綠僵菌大孢變種 Metarhizium majarosporae= anisopliae var. majus
人肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
SKOV3/Taxol-25, 人卵巢紫杉醇耐藥細(xì)胞株 Human
鼠李糖桿菌 Lactobacillus rhamnosus
蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensisHigh magnesium medium
M14 (pirellula marina) medium
Medium with chloroacrylic acid
Methylobacterium medium
Modified eggerth-gagnon medium
Nutrient broth with 10% horse serum
PPYE medium
Rhodobacter changlensis medium
Sphaerotilus-leptothrix medium
Sulfurospirillum medium
Thermoplasma acidophilum medium
Tomato juice medium
YMA medium
大腸桿菌DH10B菌種
釀酒酵母INVSc1菌種
AMS2細(xì)胞株
CCC-SMC-1[CCCSMC1]細(xì)胞株
H9c2(2-1)細(xì)胞株
SK-CO-1(人結(jié)直腸腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
溝腸桿菌 Enterobacter cloacae
甘薯喙殼 Ceratocystis fimbriata
NMY51 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL現(xiàn)貨猴胚胎腎上皮細(xì)胞英文名稱(chēng):Marc145
人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs) Human
異常漢遜酵母 Hansenula anomala
豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna
HFF-1(人包皮成纖維細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
三寶壟根霉 Rhizopus semaranzensis