培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
產(chǎn)品屬性:
名稱 小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞
2.組織來(lái)源:腦組織
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞分離自腦皮層組織;大腦分左右兩個(gè)半球,大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分,它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。少突膠質(zhì)細(xì)胞分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng),在銀浸染標(biāo)本中,少突膠質(zhì)細(xì)胞比星狀膠質(zhì)細(xì)胞小,其突起也較小而少,呈珠狀,故被稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞或寡突膠質(zhì)細(xì)胞。少突膠質(zhì)細(xì)胞(oligodendrocyte)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的成髓鞘神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,其發(fā)育要經(jīng)歷少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、前少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、未成熟和成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞等階段。有學(xué)者將少突膠質(zhì)細(xì)胞按其發(fā)育程度和形態(tài)分為三型。但是,細(xì)胞發(fā)育是一個(gè)連續(xù)的過(guò)程,其形態(tài)、表達(dá)產(chǎn)物和功能的演變沒(méi)有嚴(yán)格的界限,因此,其分類是相對(duì)的。這三型分別為:Ⅰ型少突膠質(zhì)細(xì)胞又稱前O2A(pre-O2A progenitor cell)。細(xì)胞呈圓形,表面光滑,直徑約3μm,體外混合培養(yǎng)時(shí)成簇生長(zhǎng)在星形膠質(zhì)表面,具有很強(qiáng)的分裂增殖潛力,表達(dá)GM1、波形蛋白和多唾液酸—神經(jīng)粘附分子(polysialic acid-neural cell adhesion molecule,PSA-NCAM)等。Ⅱ型少突膠質(zhì)細(xì)胞胞體常有雙極或三極突起,極少數(shù)為單極突起,直徑約7μm,有一定的分裂增殖能力。體外培養(yǎng)時(shí)為雙潛能細(xì)胞,既可分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞又可分化為Ⅱ型星形膠質(zhì),故又稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞-Ⅱ型星形膠質(zhì)祖細(xì)胞(oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell,O2A)。O2A除表達(dá)GM1和波形蛋白外還表達(dá)GD3和GQ(淋巴雜交瘤株A2B5產(chǎn)生GQ的抗體),故常用A2B5抗體標(biāo)記O2A。Ⅲ型少突膠質(zhì)細(xì)胞不再具有分裂增殖能力,為分裂終期細(xì)胞。直徑約10μm。根據(jù)其形成髓鞘的能力,又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質(zhì)細(xì)胞。不成熟的OL胞體常伸出4~5條較粗大突起,表面還殘留有A2B5標(biāo)記物,同時(shí)也表達(dá)O1-O4抗原,無(wú)形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞突起有如蜘蛛網(wǎng),大量表達(dá)半乳糖腦苷脂(galactocerebro side,GC)、蛋白脂蛋白(proteio lipid protein,PLP)、髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)等,有對(duì)軸突髓鞘化的能力。體外培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞(簡(jiǎn)稱少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞)包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞,前兩者具有增殖能力。
5.方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞采用消化、混合細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過(guò)專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞經(jīng)A2B5免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2天半量換液1次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 雙極、多極形
傳代特性 不傳代,不增值,存活1-2周
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
土壤 DNAout30 次 小膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL
土壤 DNAout100 次 小 RNA 克隆試劑盒10 次
柱式土壤 DNAout50 次 硝酸纖維素膜,13×20cm1張
大提柱式土壤 DNAout4次 硝酸纖維素膜,13×20cm1張
柱式水樣 DNAout50 次 消解酶 ( 溶細(xì)胞酶 ) 干粉100mg
人Spondin-2 elisa分析檢測(cè)試劑盒
人SPARC相關(guān)模塊化鈣結(jié)合蛋白2(SMOC2)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人SPARC相關(guān)模塊化鈣結(jié)合蛋白1(SMOC1)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人SMAD3 elisa分析檢測(cè)試劑盒
人SMAD2 elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞小鼠促甲狀釋放激素(TRH)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠促卵泡素(FSH)elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠促卵泡素(FSH)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠促卵泡素(FSH)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠促泌素(SCGN)elisa檢測(cè)試劑盒
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。