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          小鼠臍靜脈平滑肌細胞

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          具體成交價以合同協(xié)議為準
          • 型號
          • 品牌 R&D/美國
          • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
          • 所在地 上海市

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          更新時間:2022-04-13 14:16:38瀏覽次數(shù):200

          聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

          產(chǎn)品簡介

          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
          貨號 GOY-01X1350 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
          主要用途 僅供科研使用    
          小鼠臍靜脈平滑肌細胞公司其它各種產(chǎn)品人免疫球蛋白G3(IgG3)elisa檢測試劑盒
          人免疫球蛋白G4(IgG4)elisa檢測試劑盒
          人免疫球蛋白M(IgM)elisa檢測試劑盒
          人膜聯(lián)蛋白A5(Annexin A5)elisa檢測試劑盒
          人內(nèi)皮素(ET-1)elisa檢測試劑盒

          詳細介紹

          冷凍保存細胞之方法?
          冷凍保存方法一: 冷凍管置于4 30~60 分鐘-20 30 分鐘* → -80 16~18 小時(或隔夜)液氮槽vaporphase 長期儲存。
          冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 –80 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

          圖片13.jpg

          產(chǎn)品屬性:

          產(chǎn)品名稱

          小鼠臍靜脈平滑肌細胞

          規(guī)格

          5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

          貨號

          GOY-01X1350

          名稱    小鼠臍靜脈平滑肌細胞
          2.組織來源:臍帶組織

          3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

          4.細胞簡介:

          小鼠臍靜脈平滑肌細胞分離自臍帶組織;它是臍靜脈的重要結(jié)構(gòu)組成細胞之一,在機體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu),臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈,卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。在子宮中,子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管,與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近,在此處母體和胎兒的血液間進行CO2O2,代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營養(yǎng)物質(zhì)的交換。臍動脈將胎兒產(chǎn)生的廢物運送至胎盤,臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運送給胎兒。血管平滑肌是許多重大血管疾病的細胞基礎(chǔ);血管平滑肌細胞的異常增加的生長潛力在血管疾病發(fā)生過程中起決定作用。由于臍帶是分娩過程中的廢棄物,同時從臍帶中分離人臍靜脈平滑肌細胞方法相對成熟,使得體外培養(yǎng)的臍靜脈平滑肌細胞作為研究血管的模型細胞。臍靜脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數(shù)細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網(wǎng)狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。

          5.方法簡介:

          公司實驗室分離的小鼠臍靜脈平滑肌細胞采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。

          6.質(zhì)量檢測:

          公司實驗室分離的小鼠臍靜脈平滑肌細胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBVHCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

          7.培養(yǎng)信息:

          培養(yǎng)基 FBS、生長添加劑、PenicillinStreptomycin

          換液頻率 2-3天換液一次

          生長特性 貼壁

          細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

          傳代特性 可傳1-2

          消化液 0.25%

          培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%CO2,5%

          培養(yǎng)操作:
          1)復(fù)蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37水浴中迅速搖晃解凍,加 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?/span> 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
          2
          )細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
          1.
          棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
          2.
          1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
          3.
          6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
          4.
          將細胞懸液按 12 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
          3
          )細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
          1.
          細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
          2. 4 min 1000rpm
          離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
          3.
          將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
          陶瓷研缽 ( 直徑 60 mm)1  真菌 RNAout250

          陶瓷研缽 ( 直徑 75 mm)1  真菌 DNAout50

          真空抽濾盒1  長效期 SDS-PAGE 上樣液1mL

          第二章 “天凈沙"DNA純化產(chǎn)品  長效期 SDS-PAGE 配膠液200mL

          非凍型血液 DNA 保存液100mL  長效期 SDS-PAGE 還原劑10mL
          CD117分子(CD117)elisa分析檢測試劑盒

          CD10分子(CD10)elisa分析檢測試劑盒

          CC趨化因子受體7(CCR7)elisa分析檢測試劑盒

          CC趨化因子受體5(CCR5)elisa分析檢測試劑盒

          CC趨化因子受體2(CCR2)elisa分析檢測試劑盒
          小鼠臍靜脈平滑肌細胞小鼠白介素18(IL-18)elisa分析檢測試劑盒

          小鼠白介素18(IL18)elisa檢測試劑盒

          小鼠白介素18(IL-18)elisa檢測試劑盒

          小鼠白介素18(IL18)elisa檢測試劑盒

          小鼠白介素18IL18elisa檢測試劑盒
          實驗報告:
          產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng):
          1
          、無菌條件下,取出1-3d SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將成1mm3左右大??;
          2
          、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4放置;
          3
          、剩下的組織再加入34mL酶消化液,混懸10s,置37消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
          4
          、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10 FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37 ,5CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
          5
          、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
          二、免疫熒光鑒定:
          1
          、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min
          2
          、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4條件下,用0.1Triton X-100透膜15min;
          3
          、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min
          4
          、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4冰箱中孵育細胞過夜;
          5
          、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37條件下放置1h;
          6
          、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。


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