詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | GOY-01X1226 |
名稱 小鼠淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞
2.組織來源:淋巴結(jié)
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡介:
小鼠淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞分離自淋巴結(jié);淋巴結(jié)是哺乳類*的周圍淋巴器官,由淋巴細(xì)胞集合而成。呈豆形,位于淋巴管行進(jìn)途中,是產(chǎn)生免疫應(yīng)答的重要器官之一。淋巴結(jié)表面包有被膜,被膜的結(jié)締組織伸入淋巴結(jié)內(nèi)形成小梁,構(gòu)成淋巴結(jié)的支架。被膜下為皮質(zhì)區(qū),淋巴結(jié)的中心及門部為髓質(zhì)區(qū)。皮質(zhì)區(qū)有淋巴小結(jié)、彌散淋巴組織和皮質(zhì)淋巴竇(簡稱皮竇),髓質(zhì)包括由致密淋巴組織構(gòu)成的髓索和髓質(zhì)淋巴竇(簡稱髓竇)。淋巴竇的竇腔內(nèi)有許多淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,從輸入淋巴管流來的淋巴液先進(jìn)入皮竇再流向髓竇,后經(jīng)輸出淋巴管離開淋巴結(jié)。淋巴結(jié)的主要功能是濾過淋巴液,產(chǎn)生淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞,參與機體的免疫反應(yīng)。淋巴結(jié)腫大或疼痛常表示其屬區(qū)范圍內(nèi)的器官有炎癥或其他病變。主要功能是濾過淋巴液,產(chǎn)生淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞,參與機體的免疫反應(yīng);當(dāng)局部感染時,細(xì)菌、病毒或癌細(xì)胞等可沿淋巴管侵入,引起局部淋巴結(jié)腫大。如該淋巴結(jié)不能阻止和消滅它們,則病變可沿淋巴管的流注方向擴散和轉(zhuǎn)移。淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞是白細(xì)胞的一種,由次級淋巴器官淋巴結(jié)產(chǎn)生,是機體免疫應(yīng)答功能的重要細(xì)胞成分;細(xì)胞為圓形細(xì)胞核,細(xì)胞質(zhì)少。成熟淋巴細(xì)胞需依賴抗原刺激而分化增殖,繼而發(fā)揮其免疫功能。
5.方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞采用分離淋巴結(jié)組織、研磨獲取單細(xì)胞懸液后通過密度梯度離心法制備而來,細(xì)胞總量約為1×10?cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的小鼠淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞經(jīng)過檢測,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 懸浮
細(xì)胞形態(tài) 圓形
傳代特性 不增殖;不傳代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
軟骨 RNAout50 次 柱式真菌 RNA-DNA 雙提試劑盒50 次
柱式軟骨 RNAout50 次 柱式真菌 DNAout50 次
石蠟包埋組織 RNAout30 次 柱式藻類 RNAout50 次
免 RNA 提取 FFPE RT-PCR 試劑盒30 次 柱式血液 RNAout50 次
柱式昆蟲 RNAout50 次 柱式血液 mtDNAout,測序級10 次
猴促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)elisa分析檢測試劑盒
猴促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)elisa分析檢測試劑盒
猴超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)elisa分析檢測試劑盒
猴補體片斷3b(C3b)elisa分析檢測試劑盒
猴補體蛋白5(C5)elisa分析檢測試劑盒
小鼠淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞絲裂原激活的蛋白/MAP(MAPK)elisa檢測試劑盒
絲狀真菌蛋白提取試劑盒(2D電泳用)100T
絲狀真菌蛋白提取試劑盒(2D電泳用)50T
絲狀真菌蛋白提取試劑盒100T
絲狀真菌蛋白提取試劑盒50T
實驗報告:
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。