詳細介紹
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | GOY-01X1195 |
名稱 微血管周細胞
2.組織來源:微血管組織
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
4.細胞簡介:
人微血管周細胞分離自微血管組織;周細胞(pericyte)又稱Rouget細胞和壁細胞,是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內(nèi)皮細胞的細胞,可以收縮。周細胞嵌入毛細血管內(nèi)皮細胞的基膜中,通過物理接觸和旁分泌信號與內(nèi)皮細胞進行細胞通訊,監(jiān)視和穩(wěn)定內(nèi)皮細胞的成熟過程。此外,周細胞還具有調控毛細血管血流量、細胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用,其多功能性是目前研究的熱點之一,所以對血管周細胞的生物學特征、標記物、細胞功能等的研究都為相關研究提供基礎資料。周細胞產(chǎn)生手指狀的外延以調控毛細血管的血流量。周細胞和內(nèi)皮細胞之間共同擁有一個基膜,基膜上有多種細胞連接,包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素、纖連蛋白以及接合素。它還參與毛細血管直徑的雙向調控;毛細血管受損時,周細胞還可增殖,分化為內(nèi)皮細胞和成纖維細胞。
5.方法簡介:
公司實驗室分離的人血管周細胞采用膠原酶-中性聯(lián)合消化法及不銹鋼網(wǎng)篩過濾法結合密度梯度離心法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質量檢測:
公司實驗室分離的人微血管周細胞經(jīng)alpha-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
實驗報告:
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
人白細胞分離液 1.078200mL 0.5mL DNA 離心超濾管 (90-150 KD)1個
人中性粒細胞分離液 1.085200mL 0.5mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)1個
人粒細胞分離液 1.113200mL 0.5mL DNA 離心超濾管 (150-250 KD)1個
小鼠腫瘤細胞分離液 1.070200mL
小鼠內(nèi)皮細胞分離液 1.071200mL
非蛋白質巰基測試盒
非蛋白質巰基測試盒
二氫黃酮醇還原酶(DFR)測試盒
二氫黃酮醇還原酶(DFR)測試盒
花青素還原酶(ANR)測試盒
微血管周細胞人透明質酸酶(HAase)elisa檢測試劑盒
人褪黑素(MT)elisa檢測試劑盒
人脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S)elisa檢測試劑盒
人脫氧吡啶啉(DPD)elisa檢測試劑盒
人唾液粘蛋白(MG)elisa檢測試劑盒
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。