細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
名稱 H-4-II-E [H4-II-E] (大鼠肝細(xì)胞瘤) (種屬鑒定正確)
別稱 H-4-II-E; H4IIE
種屬 大鼠
年齡(性別) 不詳
組織來源 肝臟
生長特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
背景描述 H-4-Ⅱ-E細(xì)胞可誘導(dǎo)產(chǎn)生芳香烴羥化酶,用于檢測環(huán)境樣品或食物提取物種皮克級的多氯聯(lián)苯有機化合物。
生物安全等級 1
生長培養(yǎng)基 MEM+10% FBS+1% P/S
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃
保藏機構(gòu) ATCC; CRL-1548 ATCC; CRL-9185 BCRC; 60209 ECACC; 87031301
使用方法:
收到細(xì)胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達到80%匯合時準(zhǔn)備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M行接種傳代,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
非凍型細(xì)菌 RNA 保存液250mL 轉(zhuǎn) Lectin 基因植物 PCR Mix100 次
非凍型拭子病毒保存液100mL 轉(zhuǎn) ESPES-NOs 基因植物 PCR Mix100 次
病毒沉淀劑100mL 轉(zhuǎn) ESPES 基因植物 PCR Mix100 次
水樣病毒沉淀劑10 次 專用離心管 ( 配研磨杵用 ) 50 只
動物 RNAout(TRIzol) 100mL 專用離心管 ( 配研磨杵用 ) 1000 只
大鼠胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)elisa檢測試劑盒
大鼠膀胱腫瘤抗原(BTA)elisa檢測試劑盒
大鼠半蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)elisa檢測試劑盒免費代測
大鼠白血病抑制因子受體(LIFR)elisa檢測試劑盒
大鼠白血病抑制因子(LIF)elisa檢測試劑盒
H-4-II-E [H4-II-E] (大鼠肝細(xì)胞瘤)二氫黃酮醇還原酶(DFR)測試盒
二氫辣椒堿含量試劑盒
二糖酶測試盒 測麥芽糖酶Maltase 50管/24樣 比色法
二糖酶測試盒 測乳糖酶Lactase 50管/24樣 比色法
二糖酶測試盒 測蔗糖酶Sucrase 50管/24樣 比色法
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