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          P69 (前列腺上皮細(xì)胞)

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          • 品牌 R&D/美國(guó)
          • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
          • 所在地 上海市

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          更新時(shí)間:2022-04-02 16:16:02瀏覽次數(shù):227

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          產(chǎn)品簡(jiǎn)介

          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
          貨號(hào) GOY-01X0483 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
          主要用途 僅供科研使用    
          P69 (前列腺上皮細(xì)胞)公司其它各種產(chǎn)品凋亡蛋白活性因子-1抗體(N端) 早期內(nèi)吞體相關(guān)蛋白1抗體
          淀粉樣肽前體蛋白抗體 早期發(fā)育調(diào)控蛋白2抗體
          血管緊張素原抗體 早期發(fā)育調(diào)控蛋白1抗體
          雄激素受體抗體 早期B淋巴細(xì)胞因子2抗體
          自分泌運(yùn)動(dòng)因子抗體 早期B淋巴細(xì)胞因子1抗體

          詳細(xì)介紹

          培養(yǎng)操作:
          1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37水浴中迅速搖晃解凍,加 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
          2
          )細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
          1.
          棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
          2.
          1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
          3.
          6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
          4.
          將細(xì)胞懸液按 12 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
          3
          )細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
          1.
          細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
          2. 4 min 1000rpm
          離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
          3.
          將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

          產(chǎn)品屬性:

          產(chǎn)品名稱

          P69 (前列腺上皮細(xì)胞)

          規(guī)格

          1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

          貨號(hào)

          GOY-01X0483

          名稱    P69 (前列腺上皮細(xì)胞)
          別稱 P69SV40-T; P69SV40 T; P69SV40; P69

          組織來源 前列腺

          生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞

          細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

          生長(zhǎng)培養(yǎng)基 RPMI-164010% FBS1% P/S

          推薦換液頻率 2~3/

          凍存條件

          凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

          溫度:液氮

          培養(yǎng)條件

          氣相:空氣,95%;CO25%

          溫度:37

          實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
          產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng):
          1
          、無菌條件下,取出1-3d SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大?。?/span>
          2
          、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4放置;
          3
          、剩下的組織再加入34mL酶消化液,混懸10s,置37消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
          4
          、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10 FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37 5CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
          5
          、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
          二、免疫熒光鑒定:
          1
          、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
          2
          PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4條件下,用0.1Triton X-100透膜15min;
          3
          、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
          4
          、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
          5
          、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37條件下放置1h;
          6
          、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
          TCEP 溶液,0.5M5mL  miRNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)30

          鹽酸胍溶液,8M200mL  miRNA PAGE 膠回收試劑盒40

          咪唑溶液,2M100mL  miRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒25

          咪唑25g  MgSO4溶液,10mM,PCR 級(jí)5mL

          亞氨二乙酸介質(zhì)10mL  MgCl2溶液,25mM,PCR 級(jí)5mL
          膠體金標(biāo)記的小鼠抗人IgG

          膠體金標(biāo)記的兔抗人IgG

          膠體金標(biāo)記的驢抗人IgG

          膠體金標(biāo)記的兔抗狗IgG

          膠體金標(biāo)記的兔抗馬IgG
          P69 (
          前列腺上皮細(xì)胞)大鼠鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶2(CAMK2)elisa檢測(cè)試劑盒

          大鼠鈣網(wǎng)蛋白(CRT)elisa分析檢測(cè)試劑盒

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          大鼠鈣網(wǎng)蛋白(CRT)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)

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          冷凍保存細(xì)胞之方法?
          冷凍保存方法一: 冷凍管置于4 30~60 分鐘-20 30 分鐘* → -80 16~18 小時(shí)(或隔夜)液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
          冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 –80 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。


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