詳細介紹
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | GOY-01X0444 |
名稱 SW 1990 (胰腺癌細胞) (STR鑒定正確)
別稱 SW-1990; SW 1990
種屬 人類
年齡(性別) 男性,56歲
組織來源 胰腺腺癌,脾轉(zhuǎn)移灶
生長特性 貼壁細胞
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
背景描述 SW 1990細胞是于1978年從胰腺外分泌腺的胰腺腺癌Ⅱ期患者的脾轉(zhuǎn)移灶中建立的;據(jù)報道,SW 1990細胞的植板率為29%。
生物安全等級 1
生長培養(yǎng)基 Leibovitz's L-15+10% FBS+1% P/S
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
倍增時間 ~48-72小時
凍存條件
凍存液:55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,100%
溫度:37℃
致瘤性 Yes, forms tumors in nude mice.
抗原表達情況 Blood Type A; Rh+
注意事項 1、該細胞推薦使用Leibovitz's L-15培養(yǎng)基進行培養(yǎng),Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳,會產(chǎn)生細胞毒性; 2、如您沒有無二氧化碳的培養(yǎng)箱,可使用DMEM替代Leibovitz's L-15,使用DMEM培養(yǎng)基時即可正常通入5%二氧化碳; 2、配套專用培養(yǎng)基默認Leibovitz's L-15配置,如需DMEM配方,請聯(lián)系銷售下單備注更改。
保藏機構(gòu) ATCC; CRL-2172
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?/span> 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
RNase-free Tris HCl,1M,pH 7.0100mL 植物葉綠體蛋白提取試劑盒50 次
RNase-free Tris HCl,1M,pH 7.5100mL 植物線粒體總蛋白提取試劑盒50 次
RNase-free Tris HCl,1M,pH 8.0100mL 植物蛋白酶抑制劑1mL
RNase-free Tris HCl,1M,pH 8.5100mL 植物 RNAout50 次
RNase-free Tris HCl,1M,pH 9.0100mL 植物 DNAout50 次
辣根過氧化物酶標記的兔抗豚鼠IgM
辣根過氧化物酶標記的兔抗長爪沙鼠IgG
辣根過氧化物酶標記的兔抗水貂IgG
辣根過氧化物酶標記的兔抗馬IgG
辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG
SW 1990 (胰腺癌細胞)大鼠多效生長因子(PTN)elisa檢測試劑盒
大鼠多藥耐藥蛋白1(ABCB1)elisa分析檢測試劑盒
大鼠多藥耐藥蛋白1(ABCB1)elisa檢測試劑盒
大鼠多藥耐藥蛋白1(ABCB1)elisa檢測試劑盒免費代測
大鼠兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)elisa檢測試劑盒
實驗報告:
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。