培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
產(chǎn)品屬性:
名稱 SW-13 (腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞) (STR鑒定正確)
種屬 人類
年齡(性別) 女性,55歲
組織來源 器官:腎上腺; 組織:皮質(zhì);腫瘤階段:Ⅳ級; 疾病:原發(fā)性小細(xì)胞癌
生長特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
背景描述 SW-13細(xì)胞是于1971年8月從55歲的患有腎上腺皮質(zhì)癌的白人女性患者中分離建立的。該患者的病理診斷為Ⅳ級腎上腺皮質(zhì)原發(fā)性小細(xì)胞癌。電鏡顯示,SW-13細(xì)胞有許多球形縫隙連接(BGJ)。
生長培養(yǎng)基 Leibovitz's L-15+10% FBS+1% P/S
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,100%
溫度:37℃
注意事項 1、該細(xì)胞推薦使用Leibovitz's L-15培養(yǎng)基進行培養(yǎng),Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳,會產(chǎn)生細(xì)胞毒性; 2、如您沒有無二氧化碳的培養(yǎng)箱,可使用DMEM替代Leibovitz's L-15,使用DMEM培養(yǎng)基時即可正常通入5%二氧化碳; 2、配套專用培養(yǎng)基默認(rèn)Leibovitz's L-15配置,如需DMEM配方,請聯(lián)系銷售下單備注更改。
保藏機構(gòu) #N/A
實驗報告:
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1%和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Rosetta(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10 暗盒 (5×7 英寸 )1個
Rosetta(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10 氨基磁珠2mL
Rosetta-gami(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10 氨芐溶液 ,50mg/mL10mL
Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10 氨芐干粉1g
Tuner(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10 φX174RF Ⅱ DNA30μg
Cy3標(biāo)記的兔抗大鼠IgG
Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗羊IgG
Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗羊IgG
Cy5標(biāo)記的小鼠抗羊IgG
Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗羊IgG
SW-13 (腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞)大鼠二氫轉(zhuǎn)乙酰基酶(DLAT)elisa檢測試劑盒
大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPP4)elisa檢測試劑盒
大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)elisa分析檢測試劑盒
大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)elisa檢測試劑盒
大鼠二酰甘油-O-?;D(zhuǎn)移酶同源物1(DGAT1)elisa檢測試劑盒
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。