詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號(hào) | GOY-01X1039 |
名稱 小鼠雪旺氏細(xì)胞
2.組織來源:神經(jīng)組織
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠雪旺氏細(xì)胞分離神經(jīng)組織;周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞稱施萬(wàn)(schwann,又名雪旺細(xì)胞)細(xì)胞,它沿神經(jīng)元的突起分布。施萬(wàn)細(xì)胞包裹在神經(jīng)纖維上,這種神經(jīng)纖維叫有髓神經(jīng)纖維。有髓神經(jīng)纖維和無(wú)髓神經(jīng)纖維的施萬(wàn)細(xì)胞的形態(tài)和功能有所差異,施萬(wàn)細(xì)胞的外表面有基膜,能分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,促進(jìn)受損的神經(jīng)元的存活及其軸突的再生,參與周圍神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)纖維的構(gòu)成。施萬(wàn)細(xì)胞的胞核呈長(zhǎng)卵圓形,其長(zhǎng)軸與軸突平行,核周有少量胞質(zhì)。由于施萬(wàn)細(xì)胞包在軸突的外面,故又稱神經(jīng)膜細(xì)胞(neurilemmalcell),它的外面包有一層基膜。施萬(wàn)細(xì)胞外面的一層胞膜與基膜一起往往又稱神經(jīng)膜(neurilemma),光鏡下可見此膜。在有髓神經(jīng)纖維發(fā)生中,伴隨軸突一起生長(zhǎng)的施萬(wàn)細(xì)胞表面凹陷成一縱溝,軸突位于縱溝內(nèi),溝緣的胞膜相貼形成軸突系膜(mesaxon)。軸突系膜不斷伸長(zhǎng)并反復(fù)包卷軸突,把胞質(zhì)擠至細(xì)胞的內(nèi)、外邊緣及兩端(即靠近郎氏結(jié)處),從而形成許多同心圓的螺旋膜板層,即為髓鞘。故髓鞘乃成自施萬(wàn)細(xì)胞的胞膜,屬施萬(wàn)細(xì)胞的一部分。施萬(wàn)細(xì)胞的胞質(zhì)除見于細(xì)胞的外、內(nèi)邊緣和兩端外,還見于髓鞘板層內(nèi)的施-蘭切跡。該切跡構(gòu)成螺旋形的胞質(zhì)通道,并與細(xì)胞外、內(nèi)邊緣的胞質(zhì)相通。
5.方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠雪旺氏細(xì)胞采用-膠原酶混合消化法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠雪旺氏細(xì)胞經(jīng)S-100免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
硫乙醇酸鹽平板培養(yǎng)基90mm 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基200ml
嗜熱脂肪芽孢桿菌 脫氮假單胞菌
長(zhǎng)雙歧桿菌 淡紫灰鏈霉菌
束狀刺盤孢 平沙綠僵菌
乳酸鏈球菌 類干酪乳桿菌
大鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠透明質(zhì)酸(HA)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠銅藍(lán)蛋白(CP)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠同型半(Hcy)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠鐵蛋白(Ferritin)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠雪旺氏細(xì)胞人丙酮醛(MGO)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人丙酮醛(MGO)elisa檢測(cè)試劑盒
人丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)elisa檢測(cè)試劑盒
人丙酮酸激酶R型同工酶(R-PK)elisa分析檢測(cè)試劑盒
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。